兼并引物(DegeneratePrimer)PCR_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

密码子具有兼并性,如表22-4,单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的,但可以设计成对兼并引物,扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变,但核苷酸的数量应相同。兼并度越低,产物特异性越强,设计引物时应尽量选择兼并性小的氨基酸,并避免引物3’末端兼并,针对兼并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆和序列分析。现已成...

http://qihuangzhishu.com/969/588.htm

引物

引物 的结合 引物,是一小段 单链 DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在 核酸 合成 反应时 ,作为每个 核苷酸 链进行延伸的出发点而起作用的 多核苷酸 链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。 类型 存在有自然中生物的DNA复制引物(RNA引物)和 聚合酶链式反应 (PCR)中人工合成的引物(通常为 ...

http://zhongyibaodian.net/a/64142.html

引物

引物 的结合 引物,是一小段 单链 DNA或RNA,作为DNA复制的起始点,在 核酸 合成 反应时 ,作为每个 核苷酸 链进行延伸的出发点而起作用的 多核苷酸 链,在引物的3′-OH上,核苷酸以二酯链形式进行合成,因此引物的3′-OH,必须是游离的。 类型 存在有自然中生物的DNA复制引物(RNA引物)和 聚合酶链式反应 (PCR)中人工合成的引物(通常为 ...

http://zhongyibaodian.net/a/144792.html

引物引物设计_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

要扩增模板DNA,首先要设计两条寡核苷酸引物,所谓引物,实际上就是两段与待扩增靶DNA序列互补的寡核苷酸片段,两引物间距离决定扩增片段的长度,两引物的5’端决定扩增产物的两个5’末端位置。由此可见,引物是决定PCR扩增片段长度、位置和结果的关键,引物设计也就更为重要。 引物设计的必要条件是与引物互补的靶DNA序列必须是已知的,两引物之间的序列未必清楚,这两段...

http://qihuangzhishu.com/969/583.htm

引物的量_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

引物在PCR反应中的浓度一般在0.1~1μmol/L之间。浓度过高易形成引物二聚体且产生非特异性产物。一般来说用低浓度引物经济、特异,但浓度过低,不足以完成30个循环的扩增反应,则会降低PCR的产率。

http://qihuangzhishu.com/969/577.htm

套式引物(NestedPrimer)PCR_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

用第一套引物扩增15~30个循环,再用扩增DNA片段内设定的第二套引物扩增15~30个循环,这样可使待扩增序列得到高效扩增,而次级结构却很少扩增。用起始引物限量方法或Centricon30(Amicon)分子滤过器离心,在第二套引物加入前去除第一引物。此方法已成功地用来分析中国仓鼠卵巢细胞AS52的分子突变。AS52细胞含有单拷贝的细胞gpt(guanine...

http://qihuangzhishu.com/969/589.htm

生物素随机引物标记探针方法_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

以HBV DNA为例。取HBv DNA质粒0.5μg,随机引物(Pharmacia)2μg,用TE(pH8.0)补足体积至10μl;100℃,热变性5min,骤冷10min。加10×缓冲液(500mmol/l Tris –HCl (Ph6.6),100mmol/L MgCl 2 ,10mmol/L β巯基乙醇),BSa 500μg/ml 5μl,5mmol/...

http://qihuangzhishu.com/969/524.htm

应用特异单引物法标记DNA探针_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—HCl pH7.5, 10mmol/L MgCl 2 、BSa 5mmol/L、80ng引物DNA和0.1μg连接的DNA或0...

http://qihuangzhishu.com/969/515.htm

引物法标记DNA探针法_《实用免疫细胞与核酸》_中医杂集书籍_【岐黄之术】

...内含50mmol/l Tris(pH7.5)、10mmol/l Mg-Cl 2 、10mmol/L β-巯基乙醇和500μg BSA/ml,引物片段1和2各90ng,模板DNA0.1μg,[α- 32 P]dCTp 1.5×10 6 Bq,dATp 、dGTP和dTTP各200μmol/L。标记反应包括3个步骤: (1)变性:反应管在95℃水浴5min,然后...

http://qihuangzhishu.com/969/516.htm

蠃秦氏,始兼并。传二世,楚汉争。_【三字经】

【译文】 战国末年,秦国的势力日渐强大,把其他诸侯国都灭掉了,建立了统一的秦朝。秦传到二世胡亥,天下又开始大乱,最后,形成楚汉相争的局面。 【启示】 秦王朝是我国历史上第一个中央集权制的封建专治国家。虽然秦朝统一的时间只有十五年,但其苛政却是其他朝代所不能及的。然而其统一中国、车同轨、书同文,以及统一度量衡等方面仍有它不可抹灭的贡献。

http://www.wenxue360.com/sanzijing/65.html

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