由于IEF法需大型设备，工作量较大，极大地限制了该法的临床应用。免疫印迹法为目前检测ApoE表型最常用方法。此法直接用血清（或血浆）作为样品，脱脂后进行IEF电泳，然后用特异性多克隆或单克隆抗体进行免疫印迹反应，根据黑色后图谱即可确定ApoE表型。此法比IEF法更省时、简便、准确。 1．仪器与试剂 电泳仪，垂直板式电泳槽，转移电泳槽，NC膜；主要试剂有：⑴3...
检测Apo（a）表型的方法中，以Utermann法或其改良法最为常用。这类方法先用SDS-PAGE分离Apo（a）异构体，然后用特异的多克隆或单克隆抗体作免疫印迹显示。 1．仪器与试剂 电泳仪，夹心式垂直板电泳槽及凝胶转移电泳槽，NC膜（孔径0.45μm,转移电泳用）；高分子量系列蛋白标准（MW67000～669000，Pharmacia产品）；ApoB10...
免疫印迹法 (Western blotting) 是一种将高分辨率 凝胶电泳 和 免疫化学 分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测 蛋白质 特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织 抗原 的定性定量检测、 多肽 分子 的质量测定及 病毒 的 抗体 或抗原检测等。 免疫印迹法(immunobiotting tes...
ApoE表型检测即可以以VLDL为样品，又可以直接以血清（或血浆）为样品，通过IEF电泳分析、双向PAGE或结合免疫印迹法进行测定。 1．等电聚焦（IEF）：由于三种主要ApoE异构体E2、E3和E4的等电点（pⅠ）分别为5.89、6.02和6.68，E4比E3多一个正电荷，而E2比E3少一个正电荷。因此，可应用1EF检测这些异构体间电荷差异而确定不同Apo...
本法以VLDL为测定样品。首先利用超速离心机自血清中分离VLDL，一方面可去除血清杂蛋白的干扰，另一方面也可达到富集ApoE的作用，因ApoE主要存在于VLDL。 1．仪器与试剂 电泳仪，垂直板式电泳槽，超速离心机，光密度计，大培养皿；主要试剂有：①1.00g/mlNaBr与1.20g/ml NaBr溶液；②脱脂液为乙醇/乙醚混合液（3：1,V/V）；③样品...
临床上对ApoE表型多态性的研究已有20多年的历史，许多研究表明，ApoE多态性与个体患 冠心病 （CHD）或脑卒中可能存在某种内在联系。1993年以来，又发现ApoE多态性与AD及老化有关。通过对不同人群ApoE表型频率分布差异、ApoE多态性对血脂水平的影响及在某些疾病状态时ApoE等位基因频率分布的系统深入研究，已取得许多研究成果。 1．人群ApoE表...
免疫印迹法（immunoblottingtest，IBT）亦称酶联免疫电转移印斑法（enzymelinkedimmunoelectrotransferblot，EITB），因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法Southernblot相类似，亦被称为Westernblot。免疫印迹法（图15-12）分三个阶段进行。第一阶段为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电...
体液免疫检测法 (assay of humoral immunity)，检测 体液免疫 功能的技术。分为体外检测和体内检测。体外 体液免疫检测法 包括 抗原抗体反应 、 体液 中各种可溶性免疫因素测定，体内检测为体液免疫测定技术。 体外体液免疫功能测定技术 包括两大类：抗原抗体反应和可溶性免疫 分子 测定。 抗原抗体反应 由于 抗体 主要存在于 血清 中，检...
细胞免疫检测法 (assays of cellular immunity)，检测参与 免疫应答 的各种 细胞 （即 免疫细胞 ）的数量和功能的方法。免疫细胞包括各类 白细胞 和它们的 前体细胞 。 血液 中的白细胞是成熟的免疫细胞的代表，可按形态分为 淋巴细胞 、 单核细胞 （在组织中转变成 巨噬细胞 ）、 嗜中性粒细胞 、 嗜酸性粒细胞 、 嗜碱性粒细胞 ...
...移到滤膜上。转移是原位的，即DNA片段的位置保持不变。转移结束后，经过80℃烘烤的DNA，将原位地固定于膜上。 图13-6 Southern印迹杂交示意图 当含有特定 基因 片段已原位转移到膜上后，即可与 同位素标记 了的 探针 进行杂交，并将杂交的信号显示出来。杂交通常在塑料袋中进行，袋内放置上述杂交滤膜，加入含有变性后探针的杂交溶液后，在一定温度下让 单...
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