...这些多肽产生的抗血清仅同Hp反应。表达这些抗原的DNA经用32p标记显示仅能同Hp菌株杂交。用亲和纯化的尿素酶多克隆抗体的免疫印迹显示这些克隆的抗原是尿素酶分子的一部分,但并无尿素酶活性。用上述DNA探针和重组DNA表达Hp特异性抗原对探知...
...脱氧核糖核酸(DNA)是生物界遗传的主要物质基础。生物有机体的遗传特征以密码(code)的形式编码在DNA分子上,表现为特定的核苷酸排列顺序-即遗传信息,在细胞分裂前通过DNA的复制(Replication),将遗传信息由亲代传递给子代,...
...目的序列与载体DNA正确连接的效率、重组导入细胞的效率都不是百分之百的,因而最后生长繁殖出来的细胞并不同都带有目的序列。一般一个载体只携带某一段外源DNA,一个细胞只接受一个重组DNA分子。最后培养出来的细胞群中只有一部分、甚至只有很小...
...stickier)。可与组织产生较高的非特异性结合,但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近,Wolf等(1987)建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子,这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”(oligoribo-...
...变性处理,点到膜上,使用轮状病毒体外转录的放射标记探针做斑点杂交,敏感性高于ELISA。肠道病毒也可用互补的DNA探针做斑点杂交。目前核酸分子杂交不但用来检测急性病人标本中的病毒DNA,也用于检测不易分离培养的慢性感染、潜伏感染、整合感染...
...分子损伤最早就是从研究紫外线的效应开始的。当DNA受到最易被其吸收波长(~260nm)的紫外线照射时,主要是使同一条DNA链上相邻的嘧啶以共价键连成二聚体,相邻的两个T、或两个C、或C与T间都可以环丁基环(cyclobutane ring)...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...部分序列的全长cDNA进行分子克隆,建立全长的DNA探针。适用于基因游走、转位因子和已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。图22-2 反向PCR原理示意图波浪线代表靶DNA,方块代表测翼序列,▲和△代表限制酶切位点,寡核苷酸引物与模板...
...分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记,这条链就称为核酸探针。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素...
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