...近20年来分子克隆技术的发展突飞猛进,重组DNA操作技术包括的范围不断扩大,DNA克隆的方法亦多种多样,特别是PCR技术的应用,以及RFLP、SSCP等技术的开展,使得DNA克隆技术的应用日益广泛。DNA克隆技术在动脉粥样硬化等疾病的病因...
...PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增,应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染,这是造成假阳性最大的可能。下例可形象说明污染的严重性。典型的PCR反应可在100μl反应液中扩增1012个DNA,此液倾入50nm×25m×2m...
...特异性。⒉灵敏度 杂交技术用同位素或酶标记探针,PCR反复扩增20-30次都是提高灵敏度的手段。二次PCR、PCR与Southern blot合用都是典型的例子。⒊操作简单 杂交技术因操作复杂且费时(需1-2天以上出结果),在临床实验室难以...
...特异性。⒉灵敏度 杂交技术用同位素或酶标记探针,PCR反复扩增20-30次都是提高灵敏度的手段。二次PCR、PCR与Southern blot合用都是典型的例子。⒊操作简单 杂交技术因操作复杂且费时(需1-2天以上出结果),在临床实验室难以...
...在1天或数周后出现,经固定和HE染色后可观察到巨细胞,核内有内包涵体,核周晕圈及嗜酸性胞浆内包涵体,很象“猫头鹰眼”(owl′s eye)亦可用单克隆或多克隆抗体的荧光染色等方法检查。二、血清抗体检测最常用的有补体结合试验(CF)、间接...
...20min,溴化乙锭(EB)染色5min,于紫外灯下观察结果在溴酚蓝后面有一条或二条亮红带为阳性结果,HSV-2带在前,HSV-1带在后,无带则为阴性结果。 (2))XhoI酶谱法:取HSV-1型PCR产物50μl加XhoI50U,37℃1h...
...分析法片段的大小,可用于分析基因的缺失与插入。这种方法简便、快速、灵敏,可分析ApoB基因VNTR、SP多态性。基因突变往往会造成限制性内切酶识别位点的改变,如位点丢失或产生新位点,通过PCR扩增某一特定片段,再用限制性内切酶酶切扩增产物,电泳...
...杆菌也可确立诊断。条件允许时可使用DNA探针或PCR方法。若肺炎继发尿路感染,且尿路和痰培养大肠埃希杆菌均阳性时,则也有诊断价值。...
...15-20min,EB染色5min。紫外灯下观察扩增条带。(2)Southern印迹杂交法:用32P标记的特异性探针检测PCR产物,方法同上。总之,在HSV感染性疾病的临床诊断中,PCR能对前病毒或潜伏期低复制的HSV特异性靶DNA片段进行...
...细胞内寄生,所以它只能在组织中培养。衣原体的培养取材一般应在的尿道深入0.5cm以上 3、酶标免疫反应,这是目前应用最广的检测方法。该法的优点是快速、方便、廉价和检测批量化。 4、PCR,PCR将标本数目有限的目标DNA或RNA序列成百万倍...
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