...生物素标记的核苷酸是最广泛使用的一种,如生物素-11-dUTP,可用缺口平移或末端加尾标记法。实验发现生物素可共价连接在嘧啶环的5位上,合成TTP或UTP的类似物。在离体条件下,这种生物素化dUTP可作为大肠杆菌多聚酶I(DNA酶I)的...
...,pH8.0~8.5为宜,在冰浴中反应15~30min后,加入多量氨基酸(如甘氨酸),使过量标记酯消耗掉以终止反应。此法避免了蛋白质与氧化剂的接触,又避免了与放射性碘原子的直接接触,可防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤,适用于标记缺乏酪氨酸的...
...标记125I的方法可分两大类,即直接标记法和间接标记法。直接标记法是将125I直接结合于蛋白质侧链残基的酪氨酸上。此法优点是操作简便,为125I和蛋白质的单一步骤的结合反应,它能使较多的125I结合在蛋白质上,故标记物具有高度比放射性。但...
...滴上,先室温预孵1h,再置于4℃24~36h。(7)PBS漂洗3min,3次。(8)PBS(内含1%的牛血清白蛋白)pH8.2中,5min,此步为胶体金结合作准备。(9)胶体金标记抗体液1:30~1:100,淡红色为适宜稀释液,室温孵育10...
...用于软组织肿瘤可在石蜡切片表达的抗体已有多种,请参见表12-1。表12-1 软组织细胞可用的标记抗体抗原名称标记细胞(1)角蛋白(Keratin)上皮与肌上皮细胞(2)波纹蛋(Vimentin)间叶分化细胞、内皮细胞(3)结蛋白(...
...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...表明每天能合成血浆白蛋白10g、纤维蛋白2g,而幼年大鼠骨胳中胶原的生物半寿期却长达300天。用给予人体标记15N氨基酸方法估计不同年龄组成蛋白质合成的速率,得出体重约70kg的成年男子每日蛋白质合成量大于200g(表2-3)。这个数量超过...
...最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。...
...(一)概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础,在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是:制备DNA探针,标记探针,检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来...
...用荧光素、同位素或酶标记抗体或抗原,用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的标记物与抗原或抗体化学连接之后不改变后者的免疫特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。1.免疫荧光技术 免疫荧光技术(...
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