...障碍性贫血发生。突变类型检测可用核酸测序,人工合成寡核苷酸探针作产前诊断。前者多用于研究,后者可应用于临床。现可利用PCR法扩增突变区域,再行测序或杂交分析,大大提高了灵敏度和特异性,可省去目的基因的克隆,方法也得到一定的简化。⒋密码子缺失和...
...kb-----19kb----1986年胡流清等进一步证明苯丙氨酸羧化酶的表达异常是基因点突变所致,并确定了突变点位置,并由此设计了正常和突变的各含21个核苷酸的寡核苷酸探针。↓正常探针5′TCCATTAACAGTAAGTAATTT3′突变探针...
...虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA...
...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...(一)cRNA探针的同位素标记1.标记液(转录标记)2.转录缓冲液※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。3.标记终止液4.标记探针水解液先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。5.探针水解时间注:LO...
...最新的研究表明,早期卵巢癌也有一些特异的症状,并非无迹可寻。据了解卵巢癌早期症状主要包括:腹部肿胀、饱胀感、胀气尿频、尿急;恶心、消化不良、便秘、腹泻;月经紊乱、性交疼痛;疲劳、背痛等。因为没有忽视这些病症状,70%以上的卵巢癌确诊时已是...
...分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式,是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测,必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记,这条链就称为核酸探针。因此,核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的...
...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...特异性强的DNA片段棗HSV-I和HSV-Ⅱ,胸腺激酶的寡核苷酸探针和RNA探针进行分子杂交,可快速而灵敏地对HSV感染作出诊断。2.人巨细胞病毒(human cytmegalovirus,HCMV)是先天感染的主要病原。一次感染后终年潜伏...
...DNA,也可以是RNA探针。通常探针操作的长度以100-400nt为宜,过长则杂交率减低。最近研究结果表明,寡核苷酸探针(16-30nt)能自由出入细菌和组织细胞壁,杂交效率明显高于长探针,因此,寡核苷酸探针和不对称PCR标记的小DNA探针或...
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