...。所得到的双链cDNA分子经S1核酸酶切平两端后接一个有限制酶切点的接头(linker),再经特定的限制酶消化产生粘性末端,即可与含互补末端的载体进行连接。常用的克隆载体是λ噬菌体DNA,如λgt,EMBL和Charon系列等。用这类载体...
...右心房连接的称为完全性肺静脉连接异常(total anomalous pulmonary venous connection,TAPVC),一支或几支肺静脉但不是全部肺静脉直接或通过体静脉与右心房连接的称为部分性肺静脉连接异常(...
...这里主要提一下有关果蝇转座因子(P因子)作为基因载体。因为这是很有希望的真核生物基因工程的载体,果蝇的P因子约长3kb,每端各有反向重复顺序,当它插入基因组时,可以激活或灭活近旁的基因,当它从基因组上切下来时,也可能把近旁的基因或DNA...
...提高pH值来实现。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针,再与另一种核酸单链进行分子杂交。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的,探针与靶序列...
...三、动物病毒载体 第三节 目的序列与载体的连接 一、粘性末端连接 二、平末端连接 第四节 目的基因序列的来源和分离 一、基因组DNA文库 二、cDNA文库 三、聚合酶链式反应(PCR) 四、人工化学合成 第五节 基因序列导入细胞 一、转化 ...
...于位点特异性重组,重组是由末端“a”序列区的病毒基因产物介导的。HSV-2DNA两端可连接成环状,此结构与病毒的致癌与潜伏有关。HSV-2DNA中L和S的末端重复序列主要编码特定的即刻早期转录产物,而独特序列主要编码特定的早期及晚期多肽和...
...应用的最广泛的质粒载体是pBR322,它属松弛型质粒,有抗氨苄青霉素和抗四环素两个抗性基因可作为标记基因,有许多种常用的限制酶的切点。它全长4352个核苷酸,排列顺序已全部测定,基本结构如图23-3。当需要用pBR322来克隆BamHI酶...
...从mRNA到双链DNA的逆转录过程。所得到的双链cDNA分子经S1核酸酶切平两端后接一个有限制酶切点的接头(Adapter),再经特定限制酶消化产生粘性末端,即可与含互补末端的载体进行连接。常用的克隆载体是λ噬菌体DNA,如λgt、EMBL...
...PCR技术的出现给克隆的筛选增加了一个新手段。如果已知目的序列的长度和两端的序列,则可以设计合成一对引物,以转化细胞所得的DNA为模板进行扩增,若能得到预期长度的PCR产物,则该转化细胞就可能含有目的的序列。...
...片段的基因组DNA杂交,通过PCR(引物与cDNA文库载体克隆位点两端序列对应)可以筛选到基因组DNA中的表达序列。该法还可用来筛选某一给定大片段内的微卫星DNA。2.不依赖表达的方法这些方法不用构建某一特定组织某一适当发育时期的cDNA...
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