...转变为光能放出,称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂,经增强剂将光能放大,在X光片上显示杂交信号。此方法灵敏度与同位素标记水平相当,简便快速,安全,是一种特异性好的检测手段,具有广泛的应用前景。HBV-DNA的HRP标记方法:...
...进行原位杂交的组织或细胞标本常需经固定处理。尽管许多化学物质对组织/细胞有固定作用,但核酸原位杂交的理想固定液应具备如下特点:①能很好地保持组织细胞的状态;②对核酸无抽提、修饰及降解作用;③不改变被检核酸分子在组织细胞内的定位;④对核酸及...
...水浴5min。反应完成,加入酵母tRNA10μg。分别测定参入和游离放射性计数,参入率为97.4%。标记DNA探针经醋酸钠酒精沉淀回收。将沉淀溶于10mmol/l Tris—HCl 、EDTA(pH8.0)100μl。用PCR方法标记的...
...类似,能够与以核酸为底物的酶(RNase)结合,从而保护mRNA免受破坏。另外,ICC染色以DAB呈色时,核酸探针易吸附于DAB产物上,需注意。近年随着细胞工程的进步,ICC、原位杂交技术将在细胞生物学、组织学、遗传学、病毒学、临床疾病诊断...
...、T4噬菌体两者的环状基因图都已绘成,目前正致力于人类基因图的绘制。人类基因约有5万~10万个,根据第八次国际人类基因定位工作会议,已定位的人类基因总数达1479个。ISHH技术对染色体基因图的研究,是用同位素或生物素、地高辛标记的核酸探针...
...DNA片段均参入了标记物,用此法标记的探针标记率高达97.4%。此法重复性好,简便、快速、特异、不要求模板DNA的纯度,可以大量制备。此法有普遍应用价值。标记方法如下:待标DNA模板1ng,50mmol/L KCl, 10mmol/L ...
...基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记后,分别与链霉亲和素包被的磁珠或Cy5纳米颗粒结合;探针与待测鼠疫菌的DNA杂交后,磁性纳米颗粒牢固连接靶核酸-探针结合体,用磁分离架收集后即可得纯化的特异核酸分子,经变性处理后对Cy5荧光纳米...
...的新兴技术。尤其是近年来与PCR技术结合的原位PCR技术和原位免疫PCR技术敏感性很高。本书第十八至二十三章 对有关分子生物学基础理论、核酸分子探针制备、原位分子杂交技术、聚合酶链式反应(PCR)、核酸分子杂交电镜技术、杂交与免疫细胞化学双...
...重组质粒,这样就很容易获得目的序列的克隆。根据重组载体的标志来筛选,可以筛选去大量的非目的重组体,但还只是粗筛,例如细菌可能发生变异而引起抗药性的改变,却并不代表目的序列的插入,所以需要做进一步细致的筛选。二、核酸杂交法利用标记的核酸做探针...
...(一)基本原理应用DNA探针缺口翻译(nick translation)方法,通过碱基配对以一条DNA链为模板,将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。...
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