...常用的探针标记法是缺口平移法(nicktranslation),其原理如图13-1。首先用适当浓度的DNA酶Ⅰ(DNAseⅠ)在探针DNA双链上造成缺口,然后再借助于DNA聚合酶Ⅰ(DNa poly merasⅠ)的5’→3’的外切酶活性,...
...不利健康,特别是高质量的中期染色体标本在细胞培养基础上难以得到,观察费时,对间期核的研究难以进行等。荧光原位杂交(florescencein-situ hybridization,FISH)是一种非放射性原位杂交方法。用特殊荧光素标记核酸(...
...不利健康,特别是高质量的中期染色体标本在细胞培养基础上难以得到,观察费时,对间期核的研究难以进行等。荧光原位杂交(florescencein-situ hybridization,FISH)是一种非放射性原位杂交方法。用特殊荧光素标记核酸(...
...小时内完成。作用把含某种多肽或蛋白的cDNA片段的质粒,按照第十九章 在光照下标记光敏生物素,然后经DNA酶消化1h,得到大量100~500bp长度的混合片段,变性后用于原位杂交。如为培养细胞或细胞涂片,用95%乙醇、5%乙醇固定5min,...
...分子杂交技术在电镜水平的应用中,胶体金的标记术被科技工作者认为是当前最理想的标记物(详见第二十章 )。...
...寡核苷酸探针;从放射性同位素标记到非放射性标记。令人可喜的是,这一技术还处于不断的改进和更新的过程中。...
...核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备:(1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。(2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚,分子量较小的寡核苷核...
...应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—...
...,在检测天然的细胞因子中受到限制。免疫学检测的方法多采用ELISA和RIA法,可以分为平心法、竞争法和间接法。(一)ELISA(或RIA)平心法根据抗体性质和特异性不同可有以下几种不同的平心法ILISA。1.PcAb与McAb夹心法 用纯化...
...同位素3H的标记优于其它的标记物。(二)基本操作方法1.Y染色体3H标记DNA探针原位杂交技术(1)探针标记,以3H标记Y染色体DNA探针(详见第19章 )。(2)原位杂交①RNA酶的前处理:取1ml RNA酶保存液(10mg/ml)于...
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