(一)背景染色产生的原因和防止方法 (1)第一抗体或金标抗体稀释度不合适,一般容易犯抗体使用过浓的毛病,认为抗体越浓越好,结果适得其反。应该先作方阵滴定,优选最佳稀释倍数(见第一章 ),即可避免非特异性染色,又可节 省抗体。 (2)使用正常箅清封闭和在抗体稀释液中加入 牛血 清白蛋白,可以减少非特异吸附,降低背景染色。 (3)显色的器皿必须彻底清洗,化学试剂...
...:100)室温30min。 (5)DAB·4HCl/H 2 O 2 (0.05%/0.01%),室温1.5min。上述每一步骤后应用PBS洗涤(5min×3次)。 (6)在解剖显微镜下检出免疫反应阳性部位,修整组织,用0.1mol/L磷酸缓冲液稀释的1%锇酸(pH7.4)后固定30min~1h。 (7)按常规电镜样品制备, 脱水 、包埋、超薄切片、染色观察。
染色质 (chromatin)最早是1879年Flemming提出的用以描述核中 染色 后强烈着色的物质。现在认为染色质是 细胞 间期 细胞核 内能被碱性染料染色的物质。染色质的基本 化学 成分为 脱氧核糖核酸 核蛋白 ,它是由DNA、 组蛋白 、非组蛋白和少量RNA组成的 复合物 。 基本简介 人体内各种细胞,虽然大小不一,形态各异,功能也不相同,但它们都...
1.特异性染色效价的测定直接染色以倍比稀释荧光抗体溶液如1:2,1:4,1:8……,与相应抗原标本作一系列染色,荧光强度在“+++”的最大释释度,即为该荧光抗体的染色滴度(效价)或单位。实际染色应用时,可取低一个或两个稀释度(即2~4个单位),如染色效价为1:64,实际应用时可取1:32或1:16。间接染色效价可按抗核抗体荧光染色法步骤,先用不同稀释度的荧光...
...浓度不宜过高,氧化时间不宜过长,否则会产生过度标记,即多个酶分子结合到一个蛋白A分子上。这些过度标记蛋白A的免疫反应性很差,容易产生非特异性染色。 ③标记时加入酶与SPA的比例应适合,比值过大易产生过度标记,比值小则标记蛋白A产率低。 ④过碘酸氧化结果能使酶具有多个醛基,从而能与多个蛋白分子的氨基相结合,成为一些大分子的聚合物。因此,有作者强调指出,对要求具...
近年,不少科技工作者将原位杂交组织细胞化学技术(ISHH)应用于细胞分裂中期(Metaphase)和分裂间期(Interphase)的染色体铺片上,利用标记的核苷酸探针与之进行杂交,可在光镜或电镜水平检测到不同的特异性的标记物。目前,原位杂交组织化学在染色体铺片的应用主要在三个方面:染色体的基因分配或基因图(Gene assignment)的研究、癌细胞或癌...
免疫胶体金银染色和其它免疫细胞化学方法一样,要想得到好的染色效果,关键取决于标本处理是否合适,只有使抗原性及组织结构保存的好,才能使以后的染色成功成为可能,其次要用高特异性和高效价的一抗,选择合适的稀释度。由于免疫组化方法广泛应用于不同的生物学科,所要检出的抗原种类繁多,性质也各不相同。因此,不可能有一种适用于所有抗原的固定剂,而是根据不同的抗原性质区别对待...
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外,又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
原位杂交免疫细胞化学技术的应用除在培养的离散细胞涂片和各种组织制片如恒冷箱冷冻切片、石蜡包埋切片外,又进一步扩展到染色体铺片和电镜水平。现分别予以介绍。
核酸 分解的第一步是水解 核苷酸 之间的 磷酸二酯键 ,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的 核酸酶 。不同来源的核酸酶,其 专一性 、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为 核糖核酸酶 (RNase),有些核酸酶只能作用于DNA,称为 脱氧核糖核酸酶 (DNase),有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA也能作用于DNA,因此统称为核酸酶(n...
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