放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
...p),并报道和B型胃炎及 消化性溃疡 密切相关。目前鉴定和诊断Hp感染有许多方法,但受种种因素制约,但结果受到一定影响。目前制备抗Hp单克隆抗体(Hp-mAb)的资料不多,Hp-mAb免疫过氧化物酶染色检测胃粘膜活检标本,国内未见报道。我们成功地制备了Hp-mAb,对其特性进行了一系列鉴定,并应用于临床检测,现报告如下。 1 材料和方法 1.1 Hp-mAb...
为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性,早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞 125 I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是:用放射性同位素(常用 125 I)标记LDL后,与细胞(通常为培养的单层成纤维细胞)、组织或含有LDL-R的制剂一起孵育,使LDL-R与 125 I-LDL充分结合,形成受体-配体复合物,再除...
目前的研究指出,用免疫细胞化学检查病 人血 清中的dsDNA抗体为作为 系统性红斑狼疮 的诊断依据之一。佐佐木毅等和徐世玉等发现一些临床症状和血清学检查不典型的 红斑狼疮 病人,在发病早期就出现抗dsDNA抗体,认为这可能有助于早期诊断。 1.用马疫锥虫抗原检测抗dsDNA抗体方法 (1)底物制备:用马疫锥虫感染小鼠2~4天后,取小鼠的外周血,按血液细胞计数...
要制备高比度、高纯度与免疫化学活性好的标记物,首先要有高纯度、良好免疫活性的抗原。用作放射标记加网免疫分析的特异性,所以若用纯度不高的抗原作标记,则标记后必须采取适当的步骤除去杂质,以获得高纯度的标记物。标记对象的纯化应尽量采用温和的方法,否则在纯化操作中已受潜在性损伤的蛋白质(这时表面上活性可能还是良好的),再经标记反应时所受的损伤,活性就会显着降低,影响...
通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法: 1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。 2.应用标记cDNA探钊与细胞或组织切片进行原位杂交,然后进行放射自显影。 3.细胞因子mRNA经反转录为cDNA,用特异性细胞...
放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中,制成标记探针,敏感度高于化学修饰法,但操作程...
...的生化试剂,其他化学试剂均为分析纯。721型分光光度计,岛津-GC7A型气相色谱仪。 2 方法与结果 2.1 吉林枸杞制药废渣中粗多糖的提取纯化 将吉林枸杞用50度白酒浸提、过滤,得到滤液(供制药酒等用)和制药废渣。后者用沸水煮提3次,依次为3,2,1h,过滤,滤液浓缩至糖浆状,加95%乙醇醇析,使含醇量达到80%以上,醇析物油干,依次用95%乙醇、丙酮、乙...
胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
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