...50μl，短暂离心，按94℃ 45sec，60℃ 45sec,72℃1mim 15s循环30次，72℃延伸5min，置4℃贮存。3．扩增产物的提纯及酶切取扩增产物20μl，加入醋酸铵至2.5mol/L,与无水乙醇混匀，4℃沉淀15min，...
...密码子具有兼并性，如表22-4，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对兼并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用兼并引物时寡核苷酸中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。兼并度越低，产物特异性越强，设计引物时应...
...的SSCP分析 PCR产物2μl以0.1M NaOH 2mM EDTA37°C变性10min,加3μl电泳加样缓冲液（95%甲酰胺、0.5×TBE、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯腈蓝）混匀，于7.5%聚丙烯酰胺胶室温电泳300V，3.5...
...的SSCP分析 PCR产物2μl以0.1M NaOH 2mM EDTA37°C变性10min,加3μl电泳加样缓冲液（95%甲酰胺、0.5×TBE、0.25%溴酚蓝、0.25%二甲苯腈蓝）混匀，于7.5%聚丙烯酰胺胶室温电泳300V，3.5...
...CCTCCTTGTCGAGGCCCCGAAAC3′），可以分别扩增出HSV-1469bpDNA片段（1981～2359）、HSV-2 391bp片段（1561～1953）：从二型PCR扩增产物中设计了一个不分型的特异性探针HSVP3 5‘...
...结构对PCR的干扰，增进了PCR特异性、产量和敏感度，二者相比，其主要区别在于：①Klenow酶的最适温度为37℃，扩增的产物并非全是目的序列，需用探针检测。Taq酶则不仅产率高而特异性也高。它的最适温度为74～75℃。因而使退火温度可以...
...或点突变，可选用一个限制性内切酶的切点正好在这一变异位置，使切割作用和正常人发生差异（如正常人基因可切断而患者不能，或反之），达到诊断目的。现在PCR产物经变性为DNA单链，用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，只要有一个核苷酸发生变异，其电泳迁移率就...
...近日，第四军医大学西京医院皮肤科刘玲硕士等在完成的一项国家自然科学基金资助课题中，采用细胞内PCR扩增抗体基因的方法，成功构建一库容量为3×106白癜风的噬菌体抗体库。该抗体库的建立，为进一步研究自身抗体在白癜风发生发展过程中的作用及其...
...PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增，应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染，这是造成假阳性最大的可能。下例可形象说明污染的严重性。典型的PCR反应可在100μl反应液中扩增1012个DNA，此液倾入50nm×25m×2m...
...reamplification)或同时在引物扩增序列内部选择一寡核苷酸作探针，对PCR扩增产物进行southernblt检测，则可使敏感性增加10倍～100倍，可检出难以培养的球形Hp。2 在Hp流行病学研究中的应用因为PCR检测Hp的敏感性高、特异性强、检查快速；...
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