...组织处理及预杂交等步骤与本章 中叙述的放射性同位素标记cRNA探针相同,但由于地高辛标记cRNA探针在原位杂交细胞化学中已愈来愈得到广泛的应用,我们在基本方法中仍较详细的叙述其操作过程。1.组织前处理在组织制片中以冷冻切片(厚10~30μm)...
...扩增仪则是用恒温浴机械手移位式。更接近于手工操作。PTC-51A/B体积小,智能化与自动化程序高,可以兼做套式PCR,方便实用。以上各种仪器一般都配有微电脑自动控制温度、时间及循环数,可以达到节 省劳动力的目的。在采用这些仪器作PCR试验之前,...
...PCR扩增DNA的原理是:先将含有所需扩增分析序列的靶DNA双链经热变性处理解开为两个寡聚核苷酸单链,然后加入一对根据已知DNA序列由人工合成的与所扩增的DNA两端邻近序列互补的寡聚核苷酸片段作为引物,即左右引物。此引物范围就在包括所欲...
...进行原位杂交。显示方法有二种:一种是用HRP显示,类似免疫电镜技术中采取的包埋前染色法,利用地高辛-过氧化物酶HRP显色法进行光镜水平的厚片原位杂交免疫细胞化学染色,其步骤与第二十章 叙述的原位杂交免疫细胞化学基本方法相同,只是为了减少细胞...
...增加10倍(10-3~10-4μg)。2.免疫细胞化学染色法 步骤同下,方法敏感性同免疫金银法(IGSS),优点是背景干净。四、免疫胶体铁细胞化学染色(1)组织切片脱蜡入水,0.01mol/l pH7.4 PBS洗;(2)用4%正常羊血清...
... . 北京:人民卫生出版社,19828.陈啸梅,等主编. 组织化学手册. 北京:人民卫生出版社,19829.宗铁生,主编.人体胚胎学. 北京:科学出版社,198710.杨景山,主编 . 医学细胞化学与细胞生物技术 . 北京:北京医科大学、...
...消化道直接与各种口服抗原接触,是局部粘膜免疫反应场所和中枢器官,也是炎症、溃疡、感染和肿瘤等病变的好发部位。用免疫细胞化学和组织化学对分泌性IgA(SIgA)和各种抗体分泌细胞、T淋巴细胞、巨噬细胞和肥大细胞等免疫细胞和组织相关抗原等的研究,...
...(一)试剂(1)引物:决定扩增的特异性。根据检测的DNA不同,选用不同引物,每种病原微生物都有自己特异的引物。(2)耐热的DNA聚合酶:此酶是从耐热细菌中分离出来的,能耐受高温90℃-100℃。(3)10×PCR缓冲液:500mmol/l...
...,实际上一般可达106~107倍。图22-1 PCR基本原理示意图假设扩增效率为“X”,循环数为“n”,则二者与扩增倍数“y”的关系式可表示为:y=(1+X)n。扩增30个循环即n=30时,若X=100%,则y=230=1073741824...
...诊断。免疫细胞化学技术简单易行,具有一定的特异性。且可在组织原位标记。并可用于印片或细胞悬液,配合流式细胞仪,提供更为精细的信息。目前市场供应的McAb 与PcAb可已有百种。国际统一称之为CD系列。已往还有OKT系列和Leu系列。但仍有...
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