...通过核酸标记技术可将细胞因子cDNA作为基因探钊检测细胞内细胞因子基因组DNA或mRNA。主要有以下几种方法:1.应用同位素(或非同位素)标记的cDNA探针,检测经Northernblot后细胞因子mRNA水平或采用打点杂交法。2.应用...
...基因设计并合成一对特异PNA探针,经生物素标记后,分别与链霉亲和素包被的磁珠或Cy5纳米颗粒结合;探针与待测鼠疫菌的DNA杂交后,磁性纳米颗粒牢固连接靶核酸-探针结合体,用磁分离架收集后即可得纯化的特异核酸分子,经变性处理后对Cy5荧光纳米...
...基因变异的关系起了很大的作用。但是,由于同位素不稳定和放射性危害,不能常规用于临床或法医检验,用非放射性物质(生物素、荧光素和地高辛等)标记的寡核苷酸探针分析PCR产物以确定核酸序列变异则是一种简便而安全的方法。非放射性标记物质稳定性高,...
...免疫细胞化学又称免疫组织化学、其主要原理是用标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸...
...应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—...
...1.杂交膜的选用杂交膜是一种多孔、表面积很大的固相载体,核酸一旦固定在上面,就可用杂交法进行检测。最常使用的膜是硝酸纤维素膜,用于放射性和非放射笥标记探针都很方便,产生的本底浅,与核酸结合的化学性质不是很清楚,推测为非共价键结合。经80℃...
...免疫细胞化学又称免疫组织化学、其主要原理是用标记的抗体(或抗原)对细胞或组织内的相应抗原(或抗体)进行定性、定位或定量检测,经过组织化学的呈色反应之后,用显微镜、荧光显微镜或电子显微镜观察。凡是能作抗原、半抗原的物质,如蛋白质、多肽、核酸...
...基本操作方法1.Y染色体3H标记DNA探针原位杂交技术(1)探针标记,以3H标记Y染色体DNA探针(详见第19章 )。(2)原位杂交①RNA酶的前处理:取1ml RNA酶保存液(10mg/ml)于250ml 2×SSC内,预热于37℃水浴中...
...制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物(提取的mRNA样品或细胞/组织标本)。核酸探针是指一段用放射性同位素或其他标记物(如生物素、地高辛等)标记并与目的基因互补的DNA片段或单链DNA、RNA。根据其来源可分为cDNA探针、寡核核苷酸探针...
...制备高质量的核酸探针和获得合格的待测物(提取的mRNA样品或细胞/组织标本)。核酸探针是指一段用放射性同位素或其他标记物(如生物素、地高辛等)标记并与目的基因互补的DNA片段或单链DNA、RNA。根据其来源可分为cDNA探针、寡核核苷酸探针...
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