...(一)概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础,在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是:制备DNA探针,标记探针,检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来...
...必须建立完善基因诊断的技术,这是医学检验工作者面临的新课题。目前基因诊断技术可利用核酸探针进行分子杂交或进行核酸测定来分析基因突变和突变的位置。由于mRNA分子直接转录了DNA分子上基因的信息,又直接指导蛋白质合成,在细胞内又有一定的量,故...
...通过大肠埃希菌繁殖而增殖重组质粒,也是扩增核酸的手段。但在试管中有效扩增DNA的方法,是在90年代才开展起来的多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)新技术。由于PCR灵敏度高、特异性好、操作方便,在我国...
...筛查BRCA1基因突变: 单链构象多态性分析变化梯度凝胶电泳、化学裂解错配、异源双链核酸分子测定、等位基因特异寡核苷酸杂交法、蛋白质截断试验及直接测序等。...
...一、免疫PCR所谓免疫(Immune PCR)就是利用抗体与DNA特异结合来检测抗原,把抗原抗体反应与PCR联合应用而建立的一种抗原检测系统。在免疫PCR中,一个中介分子同时具有与DNA、抗体分子特异结合的能力。其一端连接DNA(标记物)...
...解链温度(Tm),Tm值的大小与核酸分子大小和G+C所占总碱基数的百分比成正相关。变性的DNA单链在适当条件下又能恢复双螺旋结构,即复性作用。不同来源的变性核酸一起复性,则可能发生杂交,杂交是许多分子生物学技术的基础。双螺旋DNA进一步扭曲而...
...使膜随意漂浮在溶液中。(3)某些类型的尼龙膜可能产生深色背景,因此可采用其它类型的尼龙膜或改用硝酸纤维素膜。(4)在杂交和检测过程中增加封阻试剂的浓度。四、核酸的分子杂交核酸分子的固相杂交是将待测核酸样品结合在某种固相支持物上,然后与溶液...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...(一)基本原理在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后,科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似,首先利用地高辛修饰核酸探针,与细胞或组织进行...
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