胶体金标记蛋白质的原理,一般认为是由于pH值等于或稍偏碱于蛋白质等电点时,蛋白质呈电中性,此时蛋白质分子与胶体金颗粒相互间的静电作用较小,但蛋白质分子的表面张力却最大,处于一种微弱的水化状态,较易吸附于金颗粒的表面,由于蛋白质分子牢固地结合在金颗粒的表面,形成一个蛋白层,阻止了胶体金颗粒的相互接触,而使胶体金处于稳定状态,如果=低于蛋白质的等电点时,蛋白质带...
取1g RB200及PCL52g放在乳钵中研磨5min(在通风橱中)。然后加入10ml无水丙酮,放置5min,不断搅拌。过滤,用滤液进行标记抗体。剩余部分吸附在滤纸上,4℃干燥保存。 取抗体(20mg/ml)每毫升加入生理盐水和0.5mol/l pH9.0的碳酸盐缓冲液各1ml稀释。逐滴加入0.1ml RB200溶液,边加入边搅拌,在0~4℃中结合12~18...
据新华社讯 美国宾西法尼亚大学研究人员日前介绍,他们将计算机轴向断层扫描技术(CAT)和正电子断层造影术扫描技术(PET)相结合,研制出了一种新的成像技术。采用这种新技术可以更准确地检测癌症等疾病。 据报道,在临床应用中,CAT和PET通常分别使用,而宾西法尼亚大学的研究人员研制出的新成像技术将这两种技术结合起来。CAT利用X射线检查人体组织,而PET能够检...
核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备: (1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。 (2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一结构完全清楚,分子量较小的寡核苷核。 (3)酶促合成核酸:在真核细胞中获得特异的结构基因。常用方法是以mRNA为模板,利用逆转录酶合成单链cDNA,再以...
...性很强的疾病,它给畜牧业造成了严重威胁。fmd在非洲、南美洲和亚洲的很多国家呈现地方流行性。fmd带来了非常大的经济损失。因此需要一种灵敏的检测方法在帮助减少误杀未感染畜群的同时,也有利于口蹄疫的监测。 近年来,依赖核酸序列的扩增技术(nasba)经常被用来检测如 禽流感 病毒、新城疫病毒、病毒和口蹄疫病毒等引起的病毒性疾病。最近有学者通过检测从世界各地收集...
应用免疫细胞化学技术进一步研究LC表面受体或表面分子,以加深对LC功能特性的认识。通过单克隆体免疫细胞化学及RT-PCR(reverse transcriptase –ploymerase chain reaction ) 技术证实,新鲜分离的人LC能显示2种FcεRII:一种是膜相关型,可用单抗CD 12 检出;另一种为可溶性分泌型,可用RT-PCR证实。...
...至48μl,加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37 ℃ ,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。 在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。Bio-11-Dutp/dTTP(%)比值为35%时,其标记率最高,显色灵敏度达0.2pg,杂交灵敏度...
当蛋白质的最适稳定量及标记的最佳pH值被确定以后便可进行标记。具体步骤如下: (1)根据用以标记的胶体金的总量计算出所需要的待标记蛋白质的总量。 (2)在电磁搅拌下,将蛋白质溶液加入胶体金溶液中(pH已调至PI超过0.5pH),加入蛋白质时应逐滴加入,1mg的蛋白质大约5min加完。 (3)在磁性搅拌下加入5%的 牛血 清白蛋白(BSA)使其终浓度为1%,或...
一、特异性目的核酸(或基因)的制备
(1)透析除盐:蛋白质溶液内应除去多余的电解质,不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位,影响蛋白质的吸附,因此,标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水(0.005mol/l NaCl , pH7.0)透析。 (2)去除蛋白质中的沉淀:长期低温保存的蛋白质或4 ℃ 较长时间保存的抗体,特别是在浓度高于2mg/...
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