...超过其他方法,因而有利于确定细菌感染的来源和途径,如检查环境或动物传染源。目前PCR技术用于Hp流行病学研究有:3.2.1 酶切PCR扩增后的DNA产物最早由Langenberg等报告了用Hind Ⅲ限制性内切酶分析Hp全基因的差异,...
...,用一种称之为限制性核酸内切酶的酶,将其切成细小的节段。通过电泳技术,在凝胶中分离这些片段,将其置于滤纸上,加上标记探针。因为探针只与它的镜像结合,可以鉴定、识别DNA片段。...
...后的Hp染色体DNA,经过琼脂糖电脉按大小分离所得的片段,来比较各株细菌的基因组DNA酶切图型。Langenberg等报道了用HindⅢ限制性内切酶分析Hp的全基因差异。Wetherall等用斑点杂交法评价了同位素与非同位素标记Hp全基因...
...′→5′方向移动。解链酶的作用就是打开DNA双链之间的氢键。2.单链结合蛋白:(single strand binding proteins,SSBP)它与解开的单链DNA结合,使其稳定不会再度螺旋化并且避免核酸内切酶对单链DNA的水解,保证...
...染色体序列,因此又可称为染色体缓移或染色体步移。这时选择的引物虽然与核心DNA区两末端序列互补,但两引物3’端是相互反向的。扩增前先用限制性内切酶酶切样品DNA,然后用DNA连接酶连接成一个环状DNA分子,通过反向PCR扩增引物的上游片段和...
...的打点法。(二)DNA的吸印转移法(Southern Blot)DNA经过限制性内切酶消化和凝胶电泳后,放入碱性溶液中使其变性,将变性后的单链DNA从凝胶中按原来位置和顺序用滤纸吸印转移到硝酸纤维膜上,然后再与标记探针杂交。此方法比较准确地...
...strand binding proteins,SSBP)它与解开的单链DNA结合,使其稳定不会再度螺旋化并且避免核酸内切酶对单链DNA的水解,保证了单链DNA做为模板时的伸展状态,SSBP可以重复利用(图16-8)。图16-8 大肠杆菌...
...:①能在宿主细胞中复制繁殖,而且最好要有较高的自主复制能力。②容易进入宿主细胞,而且进入效率越高越好。③容易插入外来核酸片段,插入后不影响其进入宿主细胞和在细胞中的复制。这就要求载体DNA上要有合适的限制性核酸内切酶位点。④容易从宿主细胞中...
...LDL受体的亲和力仅为正常对照组的39%。由于C至T的转换,产生一个新的限制性内切酶切割部位(NsiI),这将有助于在大范围人群内检测这种突变发生率。4.其他类型的多态型距ApoB基因3'末端500个核苷酸碱基对区域,有一DNA片段构成可...
...损伤需要不同的特殊核酸内切酶来识别和切割。②由5′→3′核酸外切酶将有损伤的DNA片段切除。③在DNA聚合酶的催化下,以完整的互补链为模板,按5′→3′方向DNA链,填补已切除的空隙。④由DNA连接酶将新合成的DNA片段与原来的DNA断链...
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