...王伯沄,李玉松.核酸探针标记和检测技术的进展.中华流行病学杂志,1997;18(3A):37~429.张立农,等.半抗原Digoxingenin 标记HBv DNA探针的制备及临床应用.中国人兽共患病杂志,1990;6(3):9~1210....
...一、特异性目的核酸(或基因)的制备核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备:(1)直接分离基因核酸:即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。(2)化学合成基因核酸:即以单核苷酸为原料,以固相磷酸三酯法合成某一...
...特异性。基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类,根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针、RNA探针、cDNA探针、cRNA探针及寡核苷酸探针等几类。DNA探针还有单链和双链之分。下面分别介绍这几种探针。一、核酸探针的...
...蒸水补足体积至10μl,37℃,15min;三蒸水补足体积至49μl,DNA聚合酶i 5u,混匀,14℃过夜,加0.5mmol/l ED-TA(Ph8.0)1μl终止反应。已标记探针的提纯:10mg/ml tRNA 2μl,10mmol/L...
...应用探针DNA上的一个片段作为DNA引物,以环化探针DNA的重组质粒DNA为模板,在DNA聚合酶的作用下,通过变性,退火和延伸过程,使探针DNA得到标记。反应在0.5ml离心管内进行,总体积为25μl,内含50mmol/l Tris—...
...一次,晾干,按50μg/ml溶于200μl水中,如探针不溶时,可在60℃水溶中加热10min,离心5min,除去不溶性杂质,分装,-20℃可保存1~2年。此法简便,不仅适用于核酸标记,也适用于蛋白质标记。...
...原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行,而在未知致病基因时,则无法进行基因定位。放射性同位素标记核酸探针与染色体显带结合进行原位杂交仍有不少缺点和局限性。例如需要使用放射性同位素的特殊实验室,自显影曝光时间长,同位素标记的探针不易保存,放射污染...
...原位杂交必须在已知探针的情况下方可进行,而在未知致病基因时,则无法进行基因定位。放射性同位素标记核酸探针与染色体显带结合进行原位杂交仍有不少缺点和局限性。例如需要使用放射性同位素的特殊实验室,自显影曝光时间长,同位素标记的探针不易保存,放射污染...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...梅毒的核酸探针 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 分子杂交法:阴性 阳性:梅毒感染。...
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