...观察到,而且原先需要一、二周才能作出的诊断可以缩短至数小时。PCR反应的原理如图13-7。图13-7 PCR原理示意图黑色线代表引物由图可见,首先应按照欲检测的DNA的5’和3’端的碱基顺序各合成一段长约17-20余个碱基的寡核苷酸作为引物(...
...Apob DNA上的位置如图19-6,图19-7所示:图19-6 ApoB基因部分RFLPS示意图图19-6 ApoB基因多态性位置示意图用于PCR的引物如下:XbaⅠ-5’GGAGACTATTCAGAAGCTAAXbaⅠ-3’...
...拭子在2ml的无菌生理盐水中或PBS缓冲液中挤压洗1min,以便将标本尽量溶于溶液中,将棉拭子弃去,悬浮液于2-3000r/min离心5min,吸去上清液,细胞重新溶于100μl 1×PCR缓冲液,其中含Tween 20 0.45%,蛋白酶...
...PCR只需几个DNA分子作模板就可大量扩增,应注意防止反应体系被痕量DNA模板污染和交叉污染,这是造成假阳性最大的可能。下例可形象说明污染的严重性。典型的PCR反应可在100μl反应液中扩增1012个DNA,此液倾入50nm×25m×2m...
...通过检测病原体遗传物质来确认病原体也许是检查病原体为直接的方法了。目前比较成熟的技术包括基因探针技术和PCR技术。(一)基因探针技术用标记物标记细菌染色体或质粒DNA上的特异性片段制备成细菌探针,待检标本经过短时间培养后,经过点膜、裂解...
...多聚酶链反应 多聚酶链反应(Poly-merasechain reaction,PCR)实际上是一种核酸片段体外扩增试验。做这一试验的先决条件是首先必须弄清楚某一基因的核苷酸序列然后人工合成其中两个特异性处段(其长度以15—30个碱基为宜...
...无水乙醇置-20℃ 2h或过夜沉淀DNA;加1体积乙醇洗涤1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/l Tris-HCl,pH 8.0,1.0mmol/L EDTA)溶解DNA,37℃温育30min。(二)PCR...
...和累积率,统计胃癌发病率和死亡率的回归系数为2.68(P=0.001)和1.79(P=0.002)。结论是:Hp感染人群胃癌发生的危险性是无Hp感染人群的6倍。国内对Hp感染血清回顾性调查,发现Hp阳性者发生胃癌的危险性是阴性者的8倍。对...
...1993)对PCR产物进行单链构型多态性(SSCP)分析,可以提高PCR敏感性5倍以上。SSCP分析是应用单链DNA在非变性聚丙酰胺凝胶上电泳,根据序列的不同所产生的构型差异来分析PCr 产物。此分析能检测出小到一个碱基的差异,因而可被广泛...
...聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)技术已经用于Hp的诊断,该技术的敏感性比寡核苷酸探针增加了100倍,可以检出少至100个Hp。目前Hp的尿素酶基因和16SrRNA基因的部分序列已经测出,为PCR特异性...
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