(1)将标记的大于10nm的胶体金溶液选用15000r/min 4 ℃ 离心15min,吸出上清,弃去沉淀,以去除大的聚合物。 (2)一般在10nm以上所标记的胶体金均可在调整离心机上离心,小于10nm颗粒的胶体金用超速离心机离心,在4 ℃ 离心1h左右,弃上清,将沉淀以原体积的0.02mol./l TBSpH8.2(内含1%BSA,0.05%叠氮钠)溶解,...
为纯化免疫金探针的最好方法,其特点是简便,过滤的胶体金颗粒比较均匀,不容易凝集,而离心方法转速高,时间长,胶体金颗粒沉淀容易凝集,用凝胶过滤克服了这一弱点。选用本方法时胶体金溶液必须用 牛血 清白蛋白作稳定剂。具体操作过程如下: (1)将浓缩好的胶体金以1500r/min离心去掉大的聚合物。吸出上清待过柱。 (2)柱高34cm,直径1cm,加样体积为柱床体积...
(1)光电比色法:制备一系列不同浓度的等体积蛋白质溶液(1ml),分别加入5ml胶体金中,迅速混匀,然后,各加入1ml 10% NaCl溶液,摇匀,静置5min后测各管。根据胶体金颗粒的大小,OD在520~580nm之间测定,以OD值为纵坐标,蛋白质用量为横坐标作一曲线,取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液...
该法是以1982年Muhlpfordt法为基础,1985年Slot与Geuze对该法进行了改良,特点是通过改变鞣酸的用量制备出多种颗粒直径的胶体金,而且颗粒的直径均匀一致,很适合于双标及多标研究。制备3nm、5nm、10nm、15nm的胶体金颗粒见表5-3。 表5-3 鞣酸— 柠檬 酸三钠还原法 A 液 B 液 直径(nm) 1%柠檬酸钠(ml) 0.1mo...
早在一个世纪以前,化学家就对胶体金进行了研究,当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把 烟草 花叶 病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面...
早在一个世纪以前,化学家就对胶体金进行了研究,当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把 烟草 花叶 病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面...
早在一个世纪以前,化学家就对胶体金进行了研究,当时只是研究它的结构和金属性质。在1939年Kausche和Ruska把 烟草 花叶 病毒吸附到金颗粒上在电子显微镜下观察见金离子呈高电子密度。然而胶体金技术作为标记物应用于免疫组织化学研究是在1971年,Faulk 和Taylor首先将兔抗沙门氏菌抗血清与胶体金颗粒结合,用直接免疫细胞化学技术检测沙门氏菌的表面...
(1)1%HAuCl 4 水溶浓0.2ml加入100ml双蒸水。 (2)用0.2molK 2 CO 3 调pH至中性,再加入1ml乙醇。 (3)用20KC、125w超声波探头浸入溶液内进行超声振荡,由此法制得的胶体金颗粒为6~10nm。
(1)胶体金液的制备,应用枸椽酸三钠还原法(见第五章 )。 (2)待标记蛋白质和金溶液的准备,同前。注意点是用0.2mol/l K 2 CO 3 将金溶液pH调至5.9~6.2之间。 (3)确定胶体金与蛋白A的结合用量比例。取一系列盛有0.1ml胶体金液的小 玻璃 管,分别加入不同量的蛋白A,5min后,再各加0.25ml 10%的NaCl。如加入的蛋白A浓...
胶体铁的呈色产物亚铁氰化铁是一络合物(解离常数1×10-35),一经形成,难以再与其它化学物质发生反应。蓝色的亚铁氰化铁与棕色的DAB产物及黑色的银颗粒颜色对比明显,因此强结合免疫酶及IGSS进行光镜下抗原的双标及多标记。胶体铁(颗粒1nm)标记抗体直径比常用胶体金(5~40nm)及铁蛋白标记抗体(12nm)小,因而对固定组织具有更好的穿透力,可用于抗原的超...
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