...置于计数器上进行放射性计数。(2)亲合吸附杂交:生物素标记DNA探针与溶液中过量的靶RNA杂交,杂交物吸附到酰化亲合素包被的固相支持物(如小球)上,用特异性抗DNA:RNA杂交物的酶标单克隆抗体与固相支持物上的杂交物反应,加入酶显色底物,这个...
...。三、凝集素在免疫细胞化学中的应用凝集素可为荧光素、酶和生物素等所标记,分别进行下列染色法:1.直接法 标记物直接标记在凝集素上,使之直接与切片中的相应糖蛋白或糖脂相结合。(1)切片脱蜡至水。(2)凝集素标记物(100μg/ml),室温,...
...一般病损面积小,发生在暴光部位,病期短者治疗效果较好。 (一)光疗法补骨脂素(psoralen)及其衍生物是光毒物质,内服或外搽后经长波紫外线(uva)或日光照射可增加黑素细胞密度、酪氨酸酶活性,使黑素合成及转运增加,恢复色素。常用8-甲...
...条件(pH、温度、反应时间等)及所用氧化剂的性质等也有影响。常用的标记方法有:(一)氯胺T法氯胺T法标记效率高、重复性好、试剂便宜易得,是目前使用最多的碘标记方法。1.原理 氯氨—T(Chloramine--T)是一种温和的氧化剂,在水溶液...
...PBS冲去固定液,加含探针的杂交液覆盖(光敏生物素标记探针浓度为2.5ng/μl),在温盒中50℃孵育1~2h,取出后直接加入胶体金标记链亲合素(1mg/ml)室温孵育15min,然后在室温或37℃下用大容量(200ml/每片)洗脱液(2×...
...显影(抗人Ig用125Ⅰ标记)以显示结果(图20-4)。图20-4 用免疫印迹法检查患者血清中的HIV病毒抗体第一步:经电泳将HIV混合抗合抗原按分子量大小分离;第二步:将已分离的抗原经电印迹转移到硝酸纤维膜上;第三步:将待检病人血清加入覆盖...
...胶体金与蛋白质的结合成功与否,取决于pH值,一般只有在蛋白质等电点(PI)略偏碱的条件下二者才能牢固地结合,因此,标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3,需要降低...
...末端氨基上。2.方法125I—Bolton—Hunter试剂可用氯胺T法自行制备,出已有该试剂的苯溶液作为商品出售。使用时取一定量的标记酯(μmol 蛋白用3~5μmol标记酯),用氮气吹除苯,投入欲标记蛋白5~10μg及缓冲液10~50μl...
...通过适当厚度的铅屏蔽,将99mTc 发射的能量为141ke V的γ射线减弱后,测定99Mo发射的能量为739Kev的γ射线。2.放射化学纯度及放化纯度鉴定(1)放射化学纯度:放射性核素标记化合物都是以一定的化学形态存在的,所以:放射化学纯度...
...min×3。如用生物素标记核酸探针,应用0.3%的H2O2孵育37℃过夜,然后以蛋白酶K溶液(5μg/ml PBS)55℃孵育2h(孵育时间应根据细胞的种类而定),将孵育的载片置于96℃热板上2min,最终以蒸馏水漂洗,空气干燥。在溶液中按...
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