...切片用二甲苯脱蜡,保证了组织的完全破碎,使细胞与消化液充分接触,使DNA释放和蛋白去除更加完全;其次通过两步消化的方法,将不适于做分子杂交的降解的DNA小片段去除,仅保留那些可螺旋化的完整的DNA大分子,从而提高了DNA质量,适于做...
...颗粒的应用可简便且有效地将杂交复合体与未杂交核酸或过量的检测探针分离,大大降低非特异核酸分子的干扰,提高了检测灵敏度;Cy5荧光纳米颗粒具有的光稳定性和信号放大作用特点,使基于荧光纳米颗粒的荧光分析方法的灵敏度较传统方法显著提高。本研究建立的...
...核酸杂交与探针技术,聚合酶链反应(polymerasechain reaction,PCR)技术等。3.分子杂交:(hybridization)不同来源的核酸变性后,合并在一处进行复性,这时,只要这些核酸分子的核苷酸序列含有可以形成碱基互补...
...原位杂交术(in situ hybridization)是一种核酸分子杂交技术,它是通过检测细胞内mRNA和DNA序列片段,原位研究细胞合成某种多肽或蛋白质的基图1-11 大鼠肝大部切除后再生过程中增殖期肝细胞摄取3H标记的胸腺嘧啶核苷...
...一、核酸的化学组成组成核酸的元素有C、H、O、N、P等,其中N含量约为15%~16%,磷含量为9%~10%。由于核酸分子中的磷含量比较恒定,因此,核酸定量测定的经典方法,是以测定磷含量代表核酸量。核酸经水解可得到多核苷核,因此核苷酸是核酸...
...(一)概述基因诊断是以核酸分子杂交技术为基础,在核酸水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷和一些传染病病原体的方法。其基本过程是:制备DNA探针,标记探针,检测样本。开展这项工作的关键是要得到高灵敏度、高特异性的探针。以往人们是用放射性同位素来...
...破碎,使细胞与消化液充分接触,使DNA释放和蛋白去除更加完全;其次通过两步消化的方法,将不适于做分子杂交的降解的DNA小片段去除,仅保留那些可螺旋化的完整的DNA大分子,从而提高了DNA质量,适于做Southern印迹杂交分析。...
...琼脂糖电泳上就可以检测出来,如用更好的方法来检测PCR产物,如放射性同位素,荧光物或酶等掺入到PCR产物中,可进一步提高其灵敏度和适用性。另外,如果采用不同大小标准的DNA进行标记,在电泳时,可同时检测出多种不同的抗原分子。PCR产物的多少与...
...与转化细胞的DNA进行分子杂交,可以直接筛选和鉴定目的序列克隆。常用的方法是将转化后生长的菌落复印到硝酸纤维膜上,用碱裂菌,菌落释放的DNA就吸附在膜上,再与标记的核酸探针温育杂交,核酸探针就结合在含有目的序列的菌落DNA上而不被洗脱。核酸...
...转变为光能放出,称为化学发光。杂交后与探针结合的酶催化相应的发光剂,经增强剂将光能放大,在X光片上显示杂交信号。此方法灵敏度与同位素标记水平相当,简便快速,安全,是一种特异性好的检测手段,具有广泛的应用前景。HBV-DNA的HRP标记方法:...
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