...放射性标记核酸探针在使用中的限制,促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展,在许多方面已代替放射性标记,推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术,即酶促反应标记法和化学修饰标记法。酶促反应标记探针是用缺口平移法,随机...
...序列杂交,通过随后的 信号检测进行定性与定量分析,基因芯片在一微小的基片(硅片、玻片、塑料片等 )表面集成了大量的分子识别探针,能够在同一时间内平行分析大量的基因,进行 大信息量的筛选与检测分析[3,4]。基因芯片主要技术流程包括:芯片的...
...,因此可将对应于突变热点区的寡核苷酸探针合成或点加于DNA芯片上,通过一次杂交完成对待测样品多种突变可能性的筛查,实现对多种遗传病的高效快速诊断。国外现已成功地将这一技术用于β-珠蛋白基因的突变检测以诊断地中海贫血,其高准确性及高自动化特性...
...(一)cRNA探针的同位素标记1.标记液(转录标记)2.转录缓冲液※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。3.标记终止液4.标记探针水解液先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。5.探针水解时间注:LO...
...一、DNA探针的应用虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA...
...梅毒的核酸探针 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 分子杂交法:阴性 阳性:梅毒感染。...
...细胞因子的含量提供了方便。本法仅测定细胞因子的抗原性,与该因子活性不一定相平行,因此要了解细胞因子的生物学效应,必须结合生物学检测法。三、分子生物学方法这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已...
...细胞因子的含量提供了方便。本法仅测定细胞因子的抗原性,与该因子活性不一定相平行,因此要了解细胞因子的生物学效应,必须结合生物学检测法。三、分子生物学方法这是一类利用细胞因子的基因探针检测特定细胞因子基因表达的技术。目前所有公认的细胞因子的基因均已...
...1.缺口平移 该技术由Kelly等于1970年创立。其原理是首先用DNA酶在双链DNA探针分子的一条链上制造一些缺口(nick ),缺口处会形成3’—羟基末端,这时再在大肠杆菌DNA聚合酶I的催化下将核苷酸残基加在3’-羟基上,同时,根据...
...Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交(见Cox et al 1984),核酸探针为单链的RNA分子,产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆(图20-2)。由于它是单链的,不像双链的DNA探针,在溶液中不会再退火(...
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