一、荧光抗体的制备
荧光素 是具有光致荧光特性的染料, 荧光染料 种类很多 种类 目前常用于标记 抗体 的荧光素有以下几种。 异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水和 酒精 溶剂。有两种 异构体 ,其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与 蛋白质 结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4,...
荧光素 是具有光致荧光特性的染料, 荧光染料 种类很多 种类 目前常用于标记 抗体 的荧光素有以下几种。 异硫氰酸荧光素 (fluorescein isothiocyanate, FITC) FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末,易溶于水和 酒精 溶剂。有两种 异构体 ,其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与 蛋白质 结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4,...
应用于扫描电镜的标记物应能在扫描电镜可分辨的范围内,并能对细胞或组织抗原有较好的定位能力。在选择标记物时应根据研究目的而定,如标记细胞等由于体积较大,可用体积大的标记物;如鉴别阳性(标记细胞)与阴性(未标记细胞),而要定位受体等则需选用较小的,易于辨认的标记物。 常用的标记物为颗粒性标记物。依其特性可分为: 1.蛋白类 如血蓝蛋白、铁蛋白等。 2.病原体类 ...
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展...
此法是先进行冷冻断裂,再做免疫标记,从而可以对断裂开的各种膜结构及胞浆断面进行标记。 (1)临界点干燥法 ①固定:1.0%~2.5%戊二醛PBS液4 ℃ 1~2h,PBS冲洗3min×3。 如为细胞悬液,可加入30%BSA后加入1%戊二醛,使BSA凝胶化,将凝胶切成2mm左右的小块,用30%的甘油—PBS浸透后置于用液氮冷却的Freon中冷却。 ②冷冻断裂,...
以荧光物标记 抗体 进行 抗原 定位的技术。 荧光抗体技术 在临床检验上已用作 细菌 、 病毒 和 寄生虫 的检验及 自身免疫病 的诊断等。在细菌学检验中主要用于菌种的鉴定。 标本 材料可以是 培养物 、 感染 组织、病人分泌 排泄物 等。本法较其他鉴定细菌的 血清学 方法速度快、操作简单、敏感性高,但在细菌实验诊断中,一般只能作为一种补充手段使用,而不能代...
在RIA中,标记抗原质量的优劣,直接影响测定结果,必须制备比放射性强、纯度高的标记抗原,并保持免疫活性不受丧失。
金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜水平,金颗粒具有很高的电子密度,清晰可辨。因此,免疫电镜胶体金标记法近年来被成功地应用于生物学的各个方面,并取得了要喜的进展...
原位启动标记法(Primed in situ labelling,PRINS),又叫寡核苷酸启动法(Oligonucleotide-priming method)是Koch(1987)首先提出的,其基本原理是将未标记的寡核苷酸探针与细胞或组织中的靶DNA或RNA进行杂交,然后该寡核苷酸探针充当引物的作用,在Kelow多聚合酶的催化作用下,将生物素(或地高辛、...
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