如前所述，由于核酸探针的种类和标记物的不同，在具体应用的技术方法上也各有差异，但其基本方法和应用原则大致相同。大致可分为：①杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等；②杂交；③杂交后处理；④显示（visual－ization）：包括放射性自显影和非放射性标记的显色。 （一）固定 原位杂交组织化学技术（In Sit...
荧光显微镜所看到的荧光图像，一是具有形态学特征，二是具有荧光的颜色和亮度，在判断结果时，必须将二者结合起来综合判断。结果记录根据主观指标，即凭工作者目力观察。作为一般定性观察，基本上可靠的。随着技术科学的发展，在不同程度上采用客观指标记录判断结果，如用细胞分光亮度计，图像分析仪等仪器。但这些仪器记录的结果，也必须结合主观的判断。 荧光显微镜摄影技术对于记录荧...
一、荧光显微镜
免疫酶细胞化学是免疫细胞化学（Immunocytochemistry,ICC）中最常用的方法之一，它是在抗原抗体特异反应存在的前提条件下，借助于酶细胞化学的手段，检测某种物质（抗原/抗体）在组织细胞内存在部位的一门新技术：即预先将抗体与酶连结，再使其与组织内特异抗原反应，经细胞化学染色后，于光镜或电子显微镜下观察分析的形态学研究方法。 40多年前，Coons...
某些抗原可以用荧光素标记，制成荧光抗原，标记荧光素的方法与制备荧光抗体方法相同。用荧光抗原可以直接检查细胞或组织内的相应抗体，特异性较好，敏感性较差。染色方法同荧光抗体染色的直接法。由于多数抗原难以提纯或量少不昂贵，一般很少采用此法。
HLA-Dw特异性与HLA-DP特异性可分别通过 纯合 分型 细胞 （homozygote typing cell,HTC）及预 致敏淋巴细胞 试验（primed lymphocyte test,PLT）检测。二种方法的基本原理均是判断 淋巴细胞 在识别非已HLA 抗原决定簇 后发生的 增殖 反应。由于分型细胞来源困难以及操作手续繁琐， 细胞学 分型技术下正...
对制备的荧光抗体必须进行质量鉴定，主要进行特异性和敏感性两个方面的鉴定。
先测定荧光抗体特异性染色与非特异性染色的效价，若二者效价相差较大，则可将荧光抗体稀释至一临界浓度，使特异性染色呈阳性，而使非特异性染色保持阴性，稀释方法和染色效价测定方法相同。
...，在室温下能保存2年以上，在低温中可保存多年。易溶于水和酒精。最大吸收光谱为490～495nm，最大发射光谱为520～530nm，呈现黄绿色荧光，分子量为398.4（图3-5）。 在碱性条件下，FITC的异硫氰酸基在水溶液中与免疫球蛋白的自由氨基经碳酰胺化而形成硫碳氨基键，成为标记荧光免疫球蛋白，即荧光抗体。反应式如下（图3-6）： 一个Ig分子上最多能 标...
自1966年Crabbe首次应用免疫荧光技术进行胃粘膜抗体产生细胞研究以来,随着临床上纤维和电子内窥镜普遍应用,能通过活检取得新鲜组织标本,取材方便,材源丰富,为深入开展免疫细胞化学和组织化学技术对消化道疾病的研究起了重大的推动作用。消化道直接与各种口服抗原接触，是局部粘膜免疫反应场所和中枢器官，也是炎症、 溃疡 、感染和肿瘤等病变的好发部位。用免疫细胞化学...
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