...1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检测试剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上,用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20~25个核苷酸中标记一个地高辛甙元,然后用抗地高辛抗体的...
...的光在特定的仪器上进行测定。两种常用的标记酶,辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(AP)均有其发光底物,由此建立的CLEIA均在临床检验中应用。(一)HRP标记的CLEIA常用的底物为鲁米诺或其衍生物。鲁米诺的氧化反应在碱性缓冲液中进行,...
...在变性解离后重组合称为复性。利用两条不同来源的多核苷酸链之间的互补性而使它们形成杂交体双链叫核酸杂交。与核酸杂交技术相对应的另一项技术被称为探针技术,它是指利用标记分子对其它分子的识别性而实现对后者进行检测的一种技术,我们把标记的分子叫探针...
...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...能做出可靠的检测;②用夹心杂交法比直接滤膜杂交法特异性强,因为只有两个杂交物都杂交才能产生可检测的信号。固相夹心杂交需要两个靠近而不互相重叠的探针,一个作固相吸附探针,另一个作标记检测探针。样品基因组内核酸只有使这两个探针紧密相连才能形成...
...一次,晾干,按50μg/ml溶于200μl水中,如探针不溶时,可在60℃水溶中加热10min,离心5min,除去不溶性杂质,分装,-20℃可保存1~2年。此法简便,不仅适用于核酸标记,也适用于蛋白质标记。...
...本法反应温和,对抗原、抗体免疫活性影响小,已被广泛应用。缺点是标记率较低,一般为20~40%。1.原理此法是利用乳过氧化物酶(Lactoperoxidase)有促进微量过氧化氢对125I-的氧化作用,生成125I+,并标记在多肽、蛋白质...
...核酸分子的固相杂交是将待测核酸样品结合在某种固相支持物上,然后与溶液中的标记探针进行杂交。目前使用最多的固相支持物是硝酸纤维膜。这里重点介绍直接点样技术,转移技术及其它常用的杂交技术。(一)斑点杂交的直接点样法斑点杂交或叫打点杂交(...
...髓过氧化物酶缺陷 髓过氧化物酶缺乏症(myeloperoxidase deficiency,MPO)是一种遗传性吞噬细胞内髓过氧化物酶缺陷的免疫缺陷病,该病罕见。...
...微生物学和免疫学杂志,1990;10:1746.马立人刘耀清.光敏生物素核酸探针标记和检测试剂盒使用说明.军事医学科学院放射医学研究所,1989:67.马风林.生物素标记核酸探针技术.生物化学与生物物理进展,1989;16(27):15~178....
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