...克隆基因。这类酶如EcoB、EcoK等。第二类限制性内切酶能识别专一的核苷酸顺序,并在该顺序内的固定位置上切割双链。由于这类限制性内切酶的识别和切割的核苷酸都是专一的。所以总能得到同样核苷酸顺序的DNA片段,并能构建来自不同基因组的DNA片段...
...较小,如M13、f1、fd噬菌体等。用感染大肠杆菌的λ噬菌体改造成的载体应用最为广泛。λ噬菌体由头和尾构成,其基因组是长约49kb的线性双链DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入...
...总体积为20μl,在12~14℃反应12~16h。(8)连接反应液可置-20℃保存,供转化用。(9)关于待插入DNA片段的获得参见附注。(二)大肠杆菌感受态的制备及重组DNA的转化1.感受态的制备(1)接种单菌落于2mlLB培养液中, 37...
...利用寡核苷酸自动合成仪,可很简单地合成制备寡核苷酸探针(如15~50bp),这类探针具有以下优点:①短的探针比长探针杂交速度快,特异性强。②可以在短时间内大量制备。③在合成中进行标记制成探针。④可合成单链探针,避免了用双链DNA探针在杂交...
...大象、家猫、刺猬和黏液霉菌有何共同之处?它们与人类又有什么关系?美国国家人类基因组研究所最近决定,将绘制包括上述生物在内的18种生物的基因组图谱,用于与人类基因组进行比较研究,进一步探索生物进化史。 该研究所的科学家说,绘制这些生物的...
...1979年Teffreys根据β珠蛋白基因座位近旁出现的RFLP频率同测定的核苷酸总数,推算出人体基因组的遗传异质性约为每100个核苷酸中有一个差异。后在人体DNA随机片段的文库中分离出高度变异的超变区。从1982年起,分别在人的胰岛素...
...这是最容易连接的片段,如图24-1所示。将已经连接外源DNA的细菌质粒载体转化感受态的大肠杆菌,然后在含有AP等抗生素的平板上鉴定阳性重组体菌落,具体方法有:①检查α互补能力的丧失情况;②对小量制备的质粒DNA进行限制酶切的分析;③核酸杂交...
...据新华社讯 美国北卡罗来纳大学近日报告说,该校的一个科研小组成功破译了艾滋病病毒(HIV)的完整基因组。这对于人类理解HIV感染人体的机制,寻找抗艾新疗法提供了有力帮助。相关论文发表在8月6日出版的英国《自然》杂志上。 研究小组负责人...
...三、DNA探针已广泛应用于检测CMV,其中以32P标记的探针敏感性最高,对某些标本来说,杂交方法可能比病毒分离更敏感。四、聚合酶链式反应(PCR)(一)标本的采集及处理采集的标本包括患者的血液、尿,以及腺体组织等。由全血制备的血沉棕黄层(...
...参与“人类基因组计划”的科学家在21日出版的英国《自然》杂志上公布了最新的人类基因组图谱。此次更为精确的计算表明,人类基因数量实际在2万~2.5万之间,明显少于此前的估计。 科学家在报告中说,他们最新得到的图谱绘出了人类基因组上99%的...
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