...进行,结合的特异性大大增加,被扩增的目的片段也能保持很高的正确程度。5.对原始材料质量要求低由于PCR技术有较高的灵敏度和特异性,故仅含微量(pg,ng)的目的DNA的粗制品或者总RNA,就可以用做反应起始材料来获取目的产物。部分降解的...
...上。 上个世纪末,科学家发现了核酸干扰系统(RNAi),又称基因免疫系统。基因免疫和抗体免疫、细胞免疫共同构筑起动植物抗御疾病的有效防线,从不同水平上对抗有害物质的干 扰和侵犯。这一技术引起世界各国的关注,科学家纷纷开发基于这一技术的基因...
...生物芯片技术是近年来生命科学与微电子学相互交叉渗透发展起来的一门新技术。随着人类基因组计划(HGP)研究的不断突破,这门技术已广泛应用于基因诊断、功能基因研究、基因组文库图型分析、新药的研究与开发、法医学等诸多领域。生物芯片技术主要通过...
...高,被检样品极易被污染,样品纯化,扩增,检测区域应分开。房间应经常用紫外光照射。扩增物应定点丢弃,处理。三、核酸限制性片段长度多态性(RFLP)分析RFLP分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹(blot)技术、探针-杂交技术的综合应用,多用于...
...分析、探针制备等。注意事项:①DNA样品纯度高,Taq酶(和Klenow酶)有逆转录酶活性,DNA和RNA不能混在一起。②设计的引物分子内(特别3′端)和引物,1,2分子间不形成双链。选择性好,不增幅目的DNA以外区域的DNA。引物的G+C...
...上层液,加0.1体积3mol/L醋酸钠(pH5.2)和2.5倍体积无水乙醇,进行乙醇沉淀。将纯化的DNA加适量TE溶解,测定含量,备用(可用于目的基因结构分析,探针制备等)。除低熔点凝胶回收法外,如用一般凝胶可用透析带短暂电泳,离心管低部加...
...光敏生物素的醋酸盐很易溶于水,与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点:方法简便易行,快速省时,不需昂贵的酶和dUTP等;只需光照,探针稳定,-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RNA,抗体和酶等的标记。在原位分子杂交,斑点杂交和...
...(一)直接检出病毒核酸1.标本滴加到硝酸纤维素膜上,病毒DNA结合到膜上,在原位进行硷变性处理后,有放射标记的已知病毒DNA片段杂并,两条单股核酸按硷基到补原则结合成双股,经放射自显影,阳性结果出现斑点状杂交信号。含轮状病毒的粪便标本经热...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...----B++--++--C+-+-+-+-在体细胞杂交基础上还发展了微细胞(micro cell)技术,即制备只含少数或一条人染色体的微细胞进行细胞杂交。也可将人中期染色体进行分离直接转移到鼠类细胞中,使人染色体在受体细胞中裂解变成短的DNA...
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