（一）探针的选择 根据不同的杂交实验要求，应选择不同的核酸探针。在大多数情况下，可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下，必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如，在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸探针，在检测单链靶序列时应选用与其互补的DNA单链探针（通过克隆人M13噬菌体DNA获得）或RNA探针，寡核苷酸探针也可。...
放射性标记核酸探针在使用中的限制，促使非放射性标记核酸探针的研制迅速发展，在许多方面已代替放射性标记，推动分子杂交技术的广泛应用。目前已形成两大类非放射标记核酸技术，即酶促反应标记法和化学修饰标记法。 酶促反应标记探针是用缺口平移法，随机引物法或末端加尾法等把修饰的核苷酸如生物素-11-dUTP掺入到探针DNA中，制成标记探针，敏感度高于化学修饰法，但操作程...
一、 基因组 DNA 文库 从 生物 组织细胞提取出全部DNA，用 物理 方法（ 超声波 、搅拌剪力等）或酶法（ 限制性核酸内切酶 的不完全酶解）将DNA降解成预期大小的片段，然后将这些片段与适当的载体（常用 噬菌体 、粘粒或YAC载体）连接，转入 受体 细菌 或 细胞 ，这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的 重组DNA 分子 ，而且可以...
...005mol/L EDTA 37～56℃ 无须预处理 0.5% SDS a：链霉蛋白酶是从链球菌（Streptomycesgriseus）中分离到的一种丝氨酸酶和酸性蛋白酶的混合物。 b：自消化可消除DNA酶和RNA酶的污染，经自消化的链酶蛋白酶的配制方法如下：把该酶的粉末溶解于10mmol./lTris·HCl(pH7.5)、10mmol/l NaCl中，...
核酸 是由 核苷酸 聚合而成的 高分子化合物 ，是所有 生物 遗传信息 的 携带者 。根据核苷酸 分子 中 戊糖 的类型，将核酸分为 脱氧核糖核酸 ( DNA )和 核糖核酸 ( RNA )两大类。 核苷酸由 磷酸基 、戊糖和 含氮碱基 组成， 碱基 包括嘌呤和 嘧啶 两大类。DNA一般含A、C、G、T四种碱基，RNA含A、C、G、U四种碱基。 四种核苷酸按...
...双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变（如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等），称为DNA变性。加热、改变DNA溶液的pH、或受有机溶剂（如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等）等理化因素的影响，均可使DNA变性。 通常，可利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化追踪变性过程。因为DNA在260nm处有最大吸收值这一特征是由于含有碱基组...
1．光敏生物素标记核酸 目前使用的光标生物素试剂有两种：光生物素（乙酸盐）和 补骨脂 素生物素。它们都是由一个光敏基团、一个连接臂和一个生物素基团组成。光生物素的光敏基团是-N3，它在光作用下可与核酸中的碱基结合。 补骨脂 素生物素中的光敏基团补骨脂素在光照（320～400μm）下，可与单链或双链核酸发生反应，反应主要在T上，C上也有一定程度的反应。光敏生物...
有了质量好的抗原，还必须选择适当的免疫途径，才能产生质量好（特异性强和效价高）的抗体。 （一）用于免疫的动物 作免疫用的动物有哺乳类和 禽类 ，主要为羊、马、家兔、猴、猪、豚鼠、鸡等，实验室常用者为家兔、 山羊 和豚鼠等。动物种类的选择主要根据抗原的生物学特性和所要获得抗血清数量，如一般制备抗r-免疫球蛋白抗血清，多用家兔和山羊，因动物反应良好，而且能够提供...
分子杂交是核酸链间碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的分子进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法是放射性同位素标记。常用的放射性同位素有32P和35S前者能量高，信号强，最常用。放射性同...
核酸 是生物体内的 高分子化合物 ，包括 DNA 和 RNA 两大类。 一、元素组成 组成核酸的元素有C、H、O、N、P等，与 蛋白质 比较，其组成上有两个特点：一是核酸一般不含元素S，二是核酸中P元素的含量较多并且恒定，约占9～10%。因此，核酸定量测定的经典方法，是以测定P含量来代表核酸量。 二、 化学 组成与基本单位 核酸经水解可得到很多 核苷酸 ，因...
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