若切片或其他标本经某种荧光抗体染色后,未获得阳性结果,而又疑有另外的病原体存在时,可用相应的荧光抗体再染色。 有时存档蜡块不能再用以切片,也可用存档的HE染色标本,褪去盖片和颜色,再作免疫荧光或其它免疫细胞化学的染色。
1.原理常规的G带显带技术,在 人类 染色体中仅观察到320~450条带纹,对于一些染色体细微结构异常的识别是不够的。 氨甲碟呤抑制二氢叶酸还原酶,阻止叶酸转变为四氢叶酸,从而干扰了脱氧胸腺嘧啶核苷酸的合成,阻止了DNA的复制,使细胞被阻止在S期内。胸腺嘧啶核苷解除氨甲喋呤的作用,让被阻滞的细胞同时开始进行DNA复制,进而同步分裂;放线菌素D可增加染色体的长...
在某些物质活性检测、神经递质共存的研究、临床肿瘤的分型、定性,以及预后的估测等中,ICC显示了巨大的优势,它不仅能与Carbon、荧光色素、同位素追踪标记及其它组织化学方法(例如PAS染色法)结合,显示两种物质的共存,提示组织细胞的功能,而且本身亦可进行双重染色,研究一些抗原物质的共存,这里仅简单介绍ICC双重染色的几种方法。
组织的非特异性染色的机理很复杂,其产生的原因主要可分为以下几点: (1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。 (2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。 (3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。 (4)从组织中难于提...
...羊血 清封闭组织37℃ ,30min。 (3)分别以第一抗体孵育组织,4℃24h,PBS振洗10min×3; (4)用胶体铁标记的第二抗体37℃孵育30min或用桥抗联接胶体铁标记物; (5)蒸馏水洗; (6)以1%的亚铁氰化钾与1%盐酸混合液显色20in; (7)自来水洗 ; (8)核固红染核, 脱水 ,透明、封片。 以该方法染色,阳性为蓝色,胞核为红色。
一、非特异性染色的主要因素
...⑦效价高的标记抗体加0.1% NaN 3 或硫柳汞(0.1%)数滴防腐,分装放置20℃以下可长期保存,4℃~10 ℃ 能保存半年左右。 3.染色步骤染色前进行对照试验、吸收试验和抑制试验,测定抗体的纯度和特异性,同时以琼脂扩散和染色效果确定工作效价。在连续切片中,用RB200标记的IgG稀释液分别与FITC标记的IgA和IgM混合(根据染色效价,分别以对方为...
本法应用直接法或间接法的原理和步骤,可对活细胞在试管内进行染色,常用于T和B细胞、细胞培养物、瘤细胞抗原和受体等的检查和研究,阳性荧光主要在细胞膜上。FACS即采用此法原理。
1.组织加工 有人提出用冰冻切片进行CEA免疫细胞化学染色。由于非特异性荧光和需要一定设备条件,有人改用福尔马林固定和胰酶消化的方法。从我们的体会看,福尔马林固定后的切片CEA的部分抗原决定簇被遮盖,阳性结果显着受到影响。但是用冷酒精固定后的组织切片,CEA的阳性率明显升高,而且结果仍很清晰。goldenbery等同时进行CEA酶标记组织,而福尔马林固定的组...
关于免疫金银细胞化学的原理、试剂配制和光镜显示技术在本书第五章 已作了较详尽的叙述。免疫金银细胞化学技术说可应用于电镜水平。一般用于包埋前染色。其主要操作步骤如下: (1)组织固定振动切片机切片10~30μm。 (2)人3%正常 羊血 清,含0.1%Triton X—100 的PBS孵育30min,以封闭非特异性结合部位 (3)1%硼氢化钠的PBS孵育30m...
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