...19世纪后期到20世纪50年代初,是现代分子生物学诞生的准备和酝酿阶段。在这一阶段产生了两点对生命本质的认识上的重大突破。确定了蛋白质是生命的主要物质基础。19世纪末Buchner兄弟证明酵母无细胞提取液能使糖发酵产生酒精,第一次提出酶(...
...(一)cRNA探针的同位素标记1.标记液(转录标记)2.转录缓冲液※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。3.标记终止液4.标记探针水解液先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。5.探针水解时间注:LO...
...此法具有标记率高、反应体积小(3ml水平)、可用低浓度的125I原料、对多肽激素和蛋白质的免疫活性损失小、稳定等优点,系常规的碘化方法之一。1.原理 用Iodogen为氧化剂,对蛋白质和多肽抗原进行碘化标记,把125I直接引进分子中的...
...动物在实验前常常需要作适当的分组,那么就要将其标记使各组加以区别。标记的方法很多,良好的标记方法应满足标号清晰、耐久、简便、适用的要求。常用的标记法有染色、耳缘剪孔、烙印、号牌等方法。(一)颜料涂染这种标记方法在实验室最常使用,也很方便。...
...胶体铁的等电点为7.8至7.9,在pH7.4时通过离子键能与抗体IgG(pH5.8~7.3)结合而不影响抗体活性,在此条件下,Seno'对Hale'胶体铁进行了抗体标记,并成功用于免疫细胞化学染色(Seno,et al.1989),抗体...
...金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜...
...,pH8.0~8.5为宜,在冰浴中反应15~30min后,加入多量氨基酸(如甘氨酸),使过量标记酯消耗掉以终止反应。此法避免了蛋白质与氧化剂的接触,又避免了与放射性碘原子的直接接触,可防止碘源中有害物质对蛋白质的损伤,适用于标记缺乏酪氨酸的...
...标记125I的方法可分两大类,即直接标记法和间接标记法。直接标记法是将125I直接结合于蛋白质侧链残基的酪氨酸上。此法优点是操作简便,为125I和蛋白质的单一步骤的结合反应,它能使较多的125I结合在蛋白质上,故标记物具有高度比放射性。但...
...(一)基本原理在地高辛标记核酸探针广泛用于光镜水平的原位杂交试验并获极为满意的结果后,科学工作者试图将其应用于电镜水平。其基本原理和生物素标记核酸探针-PA-Gold电镜杂交技术的基本原理相似,首先利用地高辛修饰核酸探针,与细胞或组织进行...
...用于软组织肿瘤可在石蜡切片表达的抗体已有多种,请参见表12-1。表12-1 软组织细胞可用的标记抗体抗原名称标记细胞(1)角蛋白(Keratin)上皮与肌上皮细胞(2)波纹蛋(Vimentin)间叶分化细胞、内皮细胞(3)结蛋白(...
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