荧光抗体是免疫荧光细胞化学的重要技术之一,制备高特异性和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高特异性高效价的免疫血清。
免疫技术是利用抗原抗体反应进行的检测方法,即应用制备好的特异性抗原或抗体作为试剂,以检测标本中的相应抗体或抗原。它的特点是具有高度的特异性和敏感性。如将试剂抗原或试剂抗体用可以微量检测的标记物(例如放射性核素、荧光素、酶等)进行标记,则在与标本中的相应抗体或抗原反应后,可以不必测定抗原抗体复合物本身,而测定复合物中的标记物,通过标记物的放大作用,进一步提高了...
(一)荧光的产生 一此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态,当其从激发态再回复到基态时,过剩的能量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。 荧光发射的特点是:可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能,发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。 可以引起发荧光的能量种类很多,由光激发所引起的荧光称为致荧光。由化学应所引起的称...
金属类标记物的免疫标记法同切片免疫染色,即将标记物与抗体相结合,通过直接或间接法显示抗原部位。胶体金可与蛋白A相结合后与IgG分子中的Fc 段相结合。哪与卵白素(a-vidin)相结合可与结合抗体的生物素(biotin)反应。免疫金银染色法在胶体金标记后,再进行银液显影。病毒(包括噬菌体)标记物多采用不标记抗体法,即搭桥法。此法的原理是采用同种动物制备抗原的...
在某些物质活性检测、神经递质共存的研究、临床肿瘤的分型、定性,以及预后的估测等中,ICC显示了巨大的优势,它不仅能与Carbon、荧光色素、同位素追踪标记及其它组织化学方法(例如PAS染色法)结合,显示两种物质的共存,提示组织细胞的功能,而且本身亦可进行双重染色,研究一些抗原物质的共存,这里仅简单介绍ICC双重染色的几种方法。
荧光抗体是免疫荧光细胞化学的重要技术之一,制备高特异性和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高特异性高效价的免疫血清。
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像(图3-15)。 图3-15 荧光显微镜的结构和主要部件
荧光显微镜是免疫荧光细胞化学的基本工具。它是由光源、滤板系统和光学系统等主要部件组成。是利用一定波长的光激发标本发射荧光,通过物镜和目镜系统放大以观察标本的荧光图像(图3-15)。 图3-15 荧光显微镜的结构和主要部件
分光亮度法有一个缺点,即灵敏度较低。有些 标本 中酶浓度很低时往往测不出来。此时可考虑改用荧光法,可将测定灵敏度提高2-3个数量级。如科学家合成了一系列甲基伞形酮的 衍生物 ,可取代对硝基酚衍生物做为一些 水解酶 的 底物 ,由于 水解产物 甲基伞形酮有强烈荧光,大大提高测定的灵敏度,就是分光亮度法中最常用的NAD(P)H反应系统,也可改用荧光法,在340n...
(一)荧光的产生 一此化学物质能从外界吸收并储存能量(如光能、化学能等)而进入激发态,当其从激发态再回复到基态时,过剩的能量可以电磁辐射的形式放射(即发光)。 荧光发射的特点是:可产生荧光的分子或原子在接受能量后即刻引起发光;而一旦停止供能,发光(荧光)现象也随之在瞬间内消失。 可以引起发荧光的能量种类很多,由光激发所引起的荧光称为致荧光。由化学应所引起的称...
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