用各种方法提纯单一成分的抗原是产生单价特异性抗体的最主要条件。近代免疫化学技术(免疫吸收法)和柱层析法等提供了很大的可能性,可参考有关专着。
1.直接检查组织内免疫复合物法用抗补体C3等荧光抗体直接作用组织切片,与其中结合在抗原抗体复合物上的补体反应,而形成抗原抗体补体复合物---抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物的存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。 图3-4 补体法 2.间接检查组织内抗原法常将新鲜补体与第一抗体混合同时加在抗原标本切片上,经37℃孵育后,...
(1)切片固定后用毛细滴管吸取经适当稀释的免疫血清滴加在其上,置于染色盒中保持一定的湿度,37℃作用30min。然后用0.01mol/l pH7.2PBS洗两次,10min,用吸水吸去或吹干余留的液体。 (2)再滴加间接荧光抗体(如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体等),同上步骤,染色30min,37℃,缓冲盐水洗两次10min,搅拌,缓冲甘油封固,镜检。 对照染色:...
...双层玻板内,待凝。抗血清效价高时,亦可直接将抗血清混入12.0g/L琼脂中,摇匀后制板。 2.按模式图用直径3mm的金属管打孔,6×12cm免疫扩散板打孔28个,6×8cm免疫扩散板打孔16个。 3.待测血清用硫柳汞盐水稀释(按说明书),用微量加样器每份标本加1孔。加样量10μl。置湿盒(水平位置)37℃扩散24h,测沉淀环直径,如图18-2所示。 图18-...
光化学与免疫法 (一)光化学治疗(puva) 补骨脂 素或其衍生物加紫外线可作用于表皮内与受损细胞邻近尚未完破坏或正常的黑素细胞,刺激这些细胞的功能,使酪氨酸酶催化黑素的合成,促进黑素细胞的分裂和移动,致使白斑的色素逐渐恢复。白斑的色素再生还常常始于毛球部黑素细胞的增殖,随后沿毛囊转移到漏斗部,最后在邻近角朊细胞内离心性扩散。可用 补骨脂 素(psorale...
...介其中之一。 (1)制备抗HRP血清:健康雄性家兔(2.0kg以上),可先于足跖皮下注射灭活的卡介苗(共10mg),2周后重复1次,刺激机体免疫系统功能,1周后于背部脊柱两旁皮内多点注射1.0ml乳剂[(福氏完全佐剂,含HRP3.3mg(RZ=3.0)];间隔2周第2次注射,背部注入含HRP3.3mg的不完全福氏佐剂1.0mg;再间隔2周,第3次注射,2mg...
...)表型的方法中,以Utermann法或其改良法最为常用。这类方法先用SDS-PAGE分离Apo(a)异构体,然后用特异的多克隆或单克隆抗体作免疫印迹显示。 1.仪器与试剂 电泳仪,夹心式垂直板电泳槽及凝胶转移电泳槽,NC膜(孔径0.45μm,转移电泳用);高分子量系列蛋白标准(MW67000~669000,Pharmacia产品);ApoB100纯品;主要试...
1.检查抗原法 这是最早的方法,用已知特异性抗体与荧光素结合,制成荧光特异性抗体,直接与细胞或组织中相应抗原结合,在荧光显微镜下即可见抗原存在部位呈现特异性荧光。此法很特异和简便,但一种荧光抗体只能检查一种抗原,敏感性较差(图3-2)。 图3-2 直接法 2.检查抗体法 将抗原标记上荧光素,即为荧光抗原,用此荧光抗原与细胞或组织内相应抗体反应,而将抗体定位检...
...用SephadexG100长柱(40~80cm )过柱,洗脱后出现3个峰。第1个峰分子量大,是蛋白变性的聚合的大分子,尚保留部分抗原决定簇,免疫活性弱;第2个峰是纯抗原的蛋白峰,免疫活性好;第3个峰是游离 125 I或小分子碎片,不具备免疫活性。收集到的第2个纯抗原蛋白峰,免疫活性好;第3个峰是游离 125 I或小分子碎片,不具备免疫活性。收集到的第2个纯抗...
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