...中的4种碱基各自的异构体间都可以自发地相互变化(例如烯醇式与酮式碱基间的互变),这种变化就会使碱基配对间的氢键改变,可使腺嘌呤能配上胞嘧啶、胸腺嘧啶能配上鸟嘌呤等,如果这些配对发生在DNA复制时,就会造成子代DNA序列与亲代DNA不同的错误性...
...的异构体间都可以自发地相互变化(例如烯醇式与酮式碱基间的互变),这种变化就会使碱基配对间的氢键改变,可使腺嘌呤能配上胞嘧啶、胸腺嘧啶能配上鸟嘌呤等,如果这些配对发生在DNA复制时,就会造成子代DNA序列与亲代DNA不同的错误性损伤,如图16...
...centromere)及复制起点等功能序列,可插入长度达200-500kb的外源DNA,导入酵母细胞可以随细胞分裂周期复制繁殖供作克隆,成为人基因组研究计划的重要...
...PCR循环中选用的变性温度,不宜高于95℃。Taq酶现已可用基因重组的方法生产,商品名为Ampli Taq(Cetus公司)。Taq酶的完整基因长2499bp,在大肠杆菌中表达生产,含832个氨基酸。在氨基酸序列上与大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ有38...
...tissue. J Clin Path, 1991;44:990~90411.蒋三亮张思仲.用地高辛配基标记DNA探针检测人类基因单拷贝序列.遗传与疾病,1991;8(17):4~612. 吴玉涛方勤.核酸分子探针制备技术新进展.国外医学:...
...序列顺次设计于下游引物中,通过两次聚合酶链式反应将两种表位连接于一段载体基因,HindⅢ酶切位点位于载体片段与表位基因之间,将目的基因插入pUCm-T载体。酶切鉴定和序列测定证实后,利用pUCm-T载体和pcDNA3.1(+)载体共有的...
...单、双链DNA或RNA都可以作为PCR的样品。若起始材料是RNA,须先通过逆转录得到第一条cDNA。虽然PCR可以仅用极微量的样品,甚至是来自单一细胞的DNA,但为了保证反应的特异性,还应用ng级的克隆DNA,μg水平的单拷贝染色体DNA...
...建立的均相酶免疫测定称为克隆酶供体免疫测定(clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA)。CEDIA的反应模式为竞争法,测定原理为:标本中的抗原和ED标记的抗原与特异性抗体竞争结合,形成两种抗原抗体复合物。ED标记...
...DNA分子,组装在头部蛋白质外壳内部,其序列已被全部测出。λ噬菌体感染时,通过尾管将基因组DNA注入大肠杆菌,而将其蛋白质外壳留在菌外。DNA进入大肠杆菌后以其两端12bp的互补单链粘末端环化成环状双链,可以两种不同的方式繁殖(图20-3):①...
...PCR技术的出现给克隆的筛选增加了一个新手段。如果已知目的序列的长度和两端的序列,则可以设计合成一对引物,以转化细胞所得的DNA为模板进行扩增,若能得到预期长度的PCR产物,则该转化细胞就可能含有目的的序列。...
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