可在细胞涂片或组织切片上进行免疫染色。一般程序是:①标记抗体与标本中抗原反应结合;②用PBS洗去未结合的成分;③直接观察结果(免疫荧光直接法);或显色后再用显微镜观察(免疫酶直接法)。在此基础上发展出间接法,多层法,双标记法等各种方法,将在本书各有关章 节 内详述。 在免疫染色中应特别注意增强特异性染色,减少或消除非特异性染色。在各种免疫染色中都必须注意以下...
染色质 (chromatin)最早是1879年Flemming提出的用以描述核中 染色 后强烈着色的物质。现在认为染色质是 细胞 间期 细胞核 内能被碱性染料染色的物质。染色质的基本 化学 成分为 脱氧核糖核酸 核蛋白 ,它是由DNA、 组蛋白 、非组蛋白和少量RNA组成的 复合物 。 基本简介 人体内各种细胞,虽然大小不一,形态各异,功能也不相同,但它们都...
...酸(0.1mol/l PBS溶液)1h。 (13)双蒸水洗15min。 (14)系列酒精或丙酮 脱水 ,包埋、超薄切片。(15)枸椽酸铅对照染色。 为增加抗非特异性染色,有的实验室倾向在TBS中加入1%小 牛血 清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA, Sigma)。理想的免疫金染色切片,背景应清洁,无残留的金或其他无机盐颗粒,金粒集中...
1.原理常规的G带显带技术,在 人类 染色体中仅观察到320~450条带纹,对于一些染色体细微结构异常的识别是不够的。 氨甲碟呤抑制二氢叶酸还原酶,阻止叶酸转变为四氢叶酸,从而干扰了脱氧胸腺嘧啶核苷酸的合成,阻止了DNA的复制,使细胞被阻止在S期内。胸腺嘧啶核苷解除氨甲喋呤的作用,让被阻滞的细胞同时开始进行DNA复制,进而同步分裂;放线菌素D可增加染色体的长...
...合作准备。 (9)胶体金标记抗体液1:30~1:100,淡红色为适宜稀释液,室温孵育10min至1h。 (10)双蒸水洗3min,3次。 如作双重染色,则应将镍网翻过来,用另一类抗体血清,重复上述步骤(2)~(10)。 (11)5%醋酸铀(双蒸水配制)染5min,然后用双蒸水洗。 (12) 枸橼 酸铀(或醋酸铅)染色5min,双蒸水洗净。 (13)电镜观察。
1.原理染色体的化学成份是核酸和蛋白质两部分。核酸以DNA为主,蛋白质有组蛋白和非组蛋白两种。因此染色体经蛋白水解酶类物质处理后,蛋白质已被水解而使DNA分子中碱基暴露,由于碱基中G/C和A/T组合的比例不同,对染料结合的程度不一,如这一段A/T碱基的成份多,则Giemsa染料易与它结合成深染;另一段G/C碱基的成份多,则Giemsa染料不易与其结合,结果成...
在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用罗达明标记,可采用以下染色方法: 1.一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。 2.二步法双染色 先用RB200标记的B抗体染色,不必洗去,再用FITC标记的A抗体染色,按间接法进行。 结果:A抗原阳性荧光呈现绿色,B抗原阳性呈...
...害,能安全、稳定地转给后代,使基因的性状得到连续的表达。这对校正某种遗传缺陷或改进某种性状都是十分有用的。目前一些实验室正致力于构建人工微小染色体(microchromosome)。 构建染色体应包括:基因、复制起点、着丝粒和端粒。染色体上需带有基因是不言而喻的。复制起点是染色体复制所不可缺少的。着丝粒保证复制后的染色体均等地分配到两个子细胞中。端粒具有某种...
通常染色、着色较弱时,应想办法改进标本的处理的抗原的保存,提高抗体的穿透力,再重新染色。但有时组织本身抗原含量较少或标本难得(如手术材料),可尝试下述方法以提高染色强度,确保染色成功。 1.重复显色 一般认为,对ALP标记抗体,延长显色时间其反应可增强。但在同一染色液中延长显色时间,往往容易产生沉淀,出现终产物弥散现象。所以重新配制显色液继续呈色,第二孵育时...
1.基本原理 酶标抗体与荧光色素标记抗体的染色相同,亦分直接法和间接法。直接法是将酶直接标记在每一抗体上,间接法是将酶标记在第二抗体上,检测组织细胞内的特定抗原物质。间接法所用的第一抗体是对组织细胞内某种抗原的特异性抗体(80%~90%的抗血清系由家兔制得,而绝大数单克隆抗体系由小鼠制备);第二抗体则为第一抗体(家兔/小鼠的IgG)的抗体。所以,只要不同的第...
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