...蒸水补足体积至10μl,37℃,15min;三蒸水补足体积至49μl,DNA聚合酶i 5u,混匀,14℃过夜,加0.5mmol/l ED-TA(Ph8.0)1μl终止反应。已标记探针的提纯:10mg/ml tRNA 2μl,10mmol/L...
...比为1誜25,上样量大是该方法用于大生产的优势。另外,在纯化中间体的过程中,流速可达3毫升/分钟以上,这种快速的处理方法可使生产周期大为缩短,而且采用这种方法纯化中间体只需一步就可获得符合中国药典要求的产品,方法简便、易控。 ...
...和几个小肽段,胰蛋白酶则将其切成不规则的肽链。作为抗原制备常用木瓜酶切断,取得Fc段,以制备抗链血清。作为抗体试剂应用,常用胃蛋白酶切断取得F(ab')2。(七)纯化抗原的鉴定纯化抗原的鉴定方法较多,常用的有聚丙烯酰胺凝胶电泳法、结晶法、...
...结合物稳定,易于保存。常用的标记蛋白质的方法有搅拌法和透析法两种。以FITC标记为例,搅拌标记法为:先将待标记的蛋白质溶液用0.5ml/LpH9.0的碳酸盐缓冲液平衡,随后在磁力搅拌下逐滴加入FITC溶液,在室温持续搅拌4~6h后,离心,上...
...。(4)胶体金与蛋白A的结合和纯化,依上法测得所需的比例超过10%,即每30ml胶体中加入2mg蛋白A,5min后,加入0.3ml PEG作为稳定剂,然后以15000r/min离心45min(不同方法制备的金离心速度不同),略带红色的松散的...
...皮肤试验和接触性过敏的诱发是检测迟发型过敏反应(DTH)的两种常用方法。皮肤试验中诱发对曾经使病人致敏的抗原的再次应答,而接触性过敏是测试受者对从未接触过的物质发生致敏的能力。1.皮肤试验 用皮肤试验诊断DTH,常用的抗原有结核菌纯蛋白...
...棒、棉线及烧杯(500ml)、pH7.2或8.0的0.01mol/L PBS等。(2)方法及步骤:①抗体的准备:取适量已知球蛋白浓度之溶液,置入三角烧瓶中,加入生理盐水及碳酸盐缓冲液,使最后蛋白浓度为20mg/ml,缓冲液容量为总量的1/...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...凝胶电泳检测,以前者最常用,通过电泳可以判断扩增产物的大小。在临床检测中,仅通过凝胶电泳判断扩增片段大小即可满足检测的需要。通常制胶方法为100mlTBE加1.5g琼脂糖在微波锅内溶解,稍冷后倒入电泳槽。电泳后,用溴化乙淀染色20min,然后...
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