...可以在3’端标记上一个生物素。寡核苷酸35S的3’—末端标记法:将下列液体依次加入Eppendorf管中。寡核苷酸(1 pmol)1μl10×Tailingbuffer 2μl[α-35S]2μl双蒸馏水14μl末端脱氧核苷酸酶1μl(10...
...时,底物以脂溶性4-氯-1-萘酚或联茴香胺较水溶性DAB溶液为好,也可用金标、I125标抗体作为二抗,通过银染或放射自显影技术显示Apo(a)蛋白区带,但此类方法已较少使用。将生物素标记的抗体作为二抗,通过生物素-亲和素系统放大信号,可...
... Bridge Method)和过氧化物酶抗过氧化物酶法(PeroxidaseAntiperoxidase Method, PAP法)。现分述如下。...
...金标法是Faulk和Taylor(1971)提出的,并首先用于免疫电镜。它是利用胶体金在碱性环境中带有负电的性质,使其与抗体相吸附,从而将抗体标记。当用金标记的抗体与抗原反应时,在光镜水平胶金液呈现鲜艳的樱红色,不需加外进行染色。在电镜...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...探针。标记方法步骤:(1)取一小离心管(0.5ml)插入冰浴中,加入待标记DNa 1μg/5μl,95℃变性10min,迅速移入盐冰中3min。加入六核苷酸引物2μl,Dig-dNTP标记物2μl和消毒双蒸水10μl、大肠杆菌DNA聚合酶i ...
...目前已被广泛应用,特别是在病毒学和病理学的临床诊断中。这种生物素标记技术又叫酶促生物素标记技术。另一种叫光促生物素标记核酸技术,该技术是用光敏生物素(Photobiotin)标记核酸。目前应用的光敏生物素有乙酸盐和补骨脂素生物素,它们都是由三...
... 10~ 12,12~14mm的孔)的凹孔内,加热105℃90s,然后以2%多聚甲醛-磷酸缓冲液,pH7.4,固定1h,PBS漂洗3min×3。如用生物素标记核酸探针,应用0.3%的H2O2孵育37℃过夜,然后以蛋白酶K溶液(5μg/ml ...
...Boehringer – ManubeimInc, Mannhein, FRG可提供此药盒)。在上述各例中,为简便可采用直接法(图20-4A),为提高敏感度可采用间接法(图20-4B)。图20-4 生物素标记核酸探针荧光免疫反应图解生物素和地高辛用缺口平移...
...检测(Boehringer – ManubeimInc, Mannhein, FRG可提供此药盒)。在上述各例中,为简便可采用直接法(图20-4A),为提高敏感度可采用间接法(图20-4B)。图20-4 生物素标记核酸探针荧光免疫反应图解...
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