...光敏生物素的醋酸盐很易溶于水,与核酸形成的共价结合很稳定。此法有以下优点:方法简便易行,快速省时,不需昂贵的酶和dUTP等;只需光照,探针稳定,-20℃可保存12个月以上。适用于DNA和RNA,抗体和酶等的标记。在原位分子杂交,斑点杂交和...
...变性处理,点到膜上,使用轮状病毒体外转录的放射标记探针做斑点杂交,敏感性高于ELISA。肠道病毒也可用互补的DNA探针做斑点杂交。目前核酸分子杂交不但用来检测急性病人标本中的病毒DNA,也用于检测不易分离培养的慢性感染、潜伏感染、整合感染...
...Klenow片段。该酶具有完整聚合酶I的5’→3’聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性,但缺乏5’→3’核酸外切酶活性。利用Klenow片段可以填补由限制酶消解DNA所产生的3’凹陷末端。因此,用这种方法可以标记双链DNA的凹陷3’末端。用...
...RNA探针是一类很有前途的核酸探针,由于RNA是单链分子,所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针,这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的,标记效率往往不高,且受到多种因素的...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...片段,并整合到受体细胞的基因组中。如两个基因同时整合进去,就证明它们的紧密连锁关系。3.原位杂交和荧光原位杂交 重组DNA技术的建立与分子杂交相结合,从分子水平研究基因定位,发展了一系列有效方法。例如原位杂交(in situ ...
...digoxigenin –11-dUTP(图20-3)。通过随机引物或缺口翻译法(多用随机引物法),将dig-11-dUTP与探针的核酸分子相连,构成Dig-配基标记的核酸探针。将这种标记的探针与组织、细胞或染色体原位核酸分子之间的同源序列在...
...用另一盖玻片以推血涂片方法推片,或用另一盖玻片紧贴于其上,相互磨擦以使两盖玻片相对的一面涂布上PLL。该法制备的玻片,只有一面是包被有PLL,故制备时,待其晾干后,应作好记号,然后保存后备用。多聚赖氨酸可用于多种核酸杂交,方法简单,结果可靠...
...传统的方法是对腹泻粪便液直接作电镜或免疫电镜检查,但耗时较长,且由于设备上的限制,较难普遍应用。世界卫生组织已将ELISA双抗体夹心法(检测病毒抗)列为诊断轮状病毒感染的标准方法,目前国内外均有相应试剂盒出售。此外核酸电泳和核酸杂交已渐成...
...stickier)。可与组织产生较高的非特异性结合,但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近,Wolf等(1987)建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子,这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”(oligoribo-...
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