...、基因组基因探针及DNA探针等。其中cDNA探针和人工合成寡核苷酸探针常用于斑点杂交及Northernblot,而RNA探针因穿透性好更适用于原位杂交。核酸探针技术的应用已经程序化,以cDNA探针为例主要包括:①质粒DNA的提取;②靶DNA...
...RNA探针做为反义RNA探针的阴性对照。由于RNA探针是单链分子,所以它与靶序列的杂交反应极高。有报告认为其杂交率高于DNA探针的8倍。DNA合成仪的诞生使制造寡核苷酸探针成为可能,与上述探针不同的是寡核苷酸探针不是克隆性DNA探针,它是由...
...。引物浓度过高会促进引物的错误引导非特异产物合成,还会增加引物二聚体的形成。非特异产物和引物二聚体也是PCR反应的底物,与靶序列竞争DNA聚合酶,dNTP底物,从而使靶序列的扩增量降低。一般认为PCR反应中引物的终浓度为0.2~1μmol/...
...cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素,再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针,将其溶于适量的灭菌双蒸水,用紫外分光亮度计测探针的光密度(详第十九章 ),其最佳工作浓度为2μg/ml。切片的制作、预处理、预杂交、杂交和杂交后冲洗的方法同...
...靶形红细胞(target cell):红细胞中心部位染色较深,周围为苍白区域,而细胞边缘又深染,形如射击之靶。有的中心深染区不像孤岛而像从红细胞边缘延伸的半岛状态或柄状,而成不典型的靶形红细胞。靶形红细胞直径可比正常红细胞大或正常,但厚度...
...1988年德国Boehringer Manheims公司推出了一种地高辛标记DNA检测试剂盒。先将地高辛甙元通过一手臂联接至dUTP上,用随机引物法标记DNA制成探针。平均每20~25个核苷酸中标记一个地高辛甙元,然后用抗地高辛抗体的...
...诊断主要依靠综合检查。 据黄教授介绍,目前对乳腺癌的诊断主要依靠三方面:一是手诊。即医生通过用手触摸来检查,有经验的医生手诊准确率可达80%。二是B超检查。准确率也可达80%。三是钼靶射线检查。准确率也是80%。但由于三种方法各有局限性,因此...
...提高pH值来实现。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针,再与另一种核酸单链进行分子杂交。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的,探针与靶序列...
...(一)基本原理应用DNA探针缺口翻译(nick translation)方法,通过碱基配对以一条DNA链为模板,将生物素标记的某一种脱氧三磷酸核苷酸如Bio-dUTP渗入有缺口的DNA链。将生物素标记的DNA探针与细胞或组织进行原位杂交。...
...基因探针(probe)就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列,它可以包括整个基因,也可以仅仅是/基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之转录而来的RNA。1.探针的来源 DNA探针根据其来源有3种:一种来自基因组中有关的基因...
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