荧光免疫技术是标记免疫技术中发展最早的一种。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons等于1941年首次采用荧光素进行标记而获得成功。这种以荧光物质标记抗体而进行抗原定位的技术称为荧光抗体技术(fluorescentantibodytechnique)。 由于一般荧光测定中的本底较高等问题...
一、标本制作
眼底荧光 血管造影 是将能产生荧光效应的染料快速注入 血管 ,同时应用加有滤色片的眼底镜或 眼底照相 机进行观察或照像的一种检查法。由于染料随血流运行时可动态地勾划 出血 管的形态,加上荧光现象,提高了血管的对比度和可见性,使一些细微的血管变化得以辨认; 脉络膜 和 视网膜 的血供途径和血管形态不同,造影时可使这两层组织的病变得到鉴别;脉络膜荧光可衬托出 视...
在同一标本上有两个抗原需要同时显示(如A抗原和B抗原),A抗原的抗体用FITC标记,B抗原的抗体用罗达明标记,可采用以下染色方法: 1.一步法双染色 先将两种标记抗体按适当比例混合(A+B),按直接法进行染色。 2.二步法双染色 先用RB200标记的B抗体染色,不必洗去,再用FITC标记的A抗体染色,按间接法进行。 结果:A抗原阳性荧光呈现绿色,B抗原阳性呈...
用 荧光素 、 同位素 或 酶标记 抗体 或 抗原 ,用于抗原或抗体检测是目前广泛应用的敏感、可靠的方法。上述三种常用的 标记物 与抗原或抗体 化学 连接之后不改变后者的 免疫 特性。本方法可用于定性、定量或定位检测。 1. 免疫荧光技术 免疫荧光技术(immunofluorescencetechni)是用化学方法使荧光素标记的抗体(或抗原)与组织或 细胞 ...
荧光抗体是免疫荧光细胞化学的重要技术之一,制备高特异性和高效价的荧光抗体必须选用高质量的荧光素和高特异性高效价的免疫血清。
一、时间分辨荧光免疫测定
以常用荧光素作为标记物的荧光免疫测定往往受血清成分、试管、仪器组件等的本底荧光干扰,以及激发光源的杂射光的影响,使灵敏度受到很大限制。时间分辨荧光免疫测定(timeresolvedfluorescenceimmunoassay,TR-FIA)是针对这缺点加以改进的一种新型检测技术。其基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作荧光标记物,利用这类荧光物质有长荧光寿...
(一)抗体的荧光素标记 用于标记的抗体,要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。作为标记的荧光素应符合以下要求:①应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除。②荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的...
荧光物质经单一平面的偏振光蓝光(波长485nm)照射后,可吸收光能跃入激发态;在恢复至基态时,释放能量并发出单一平面的偏振荧光(波长525nm)。偏振荧光的强度与荧光物质受激发时分子转动的速度成反比。大分子物质旋转慢,发出的偏振荧光强;小分子物质旋转快,其偏振荧光弱。利用这一现象建立了荧光偏振免疫测定(floutescencepolarizationimmu...
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