...以生物素标记抗体作第一抗体,酶标记抗生物素作为第二抗体(图6-3)。操作步骤如下:图6-3 LAB技术(1)切片在含有25~50μg/ml生物素标记抗体(PBS液稀释)中孵育1h,室温。(2)PBS洗2次,每次5min。(3)用20~50...
...Biotin–Peroxidase Complex technique, 简称ABC技术)(1)基本原理:ABC法是Hsu 等于1981年在HRAB法和LAB法的基础上改良的,其特点是利用抗生物素分别连接生物素标记的第二抗体和生物素标记的酶。与...
...的机会较短序列少,克隆探针的另一优点是,可获得较强的杂交信号,因为克隆探针较寡核苷酸探针掺入的可检测标记基因更多。但是,较长的探针对于靶序列变异的识别能力又有所降低。对于仅是单个碱基或少数碱基不同的两序列,克隆探针不能区分,往往杂交信号相当...
...继后不少科技工作者在这方面做了大量的工作(Manning et al 1975,Steinert et al1976,Hutchison et al 1982)。但所应用的均是同位素标记核酸探针,直到1986年Binder首先用生物素标记的...
...DNA探针是最常用的核酸探针,指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多,有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和人类细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是...
...标记RNA探针,后者可用光敏生物素制剂BPA标记样品核酸。...
...最常用的同位素是α-32PdNTP,3HdNTP,及35SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。...
...、T4噬菌体两者的环状基因图都已绘成,目前正致力于人类基因图的绘制。人类基因约有5万~10万个,根据第八次国际人类基因定位工作会议,已定位的人类基因总数达1479个。ISHH技术对染色体基因图的研究,是用同位素或生物素、地高辛标记的核酸探针...
...获得反意RNA探针(cDNA);③依照待测核酸的核苷酸序列,应用DNA合成仪合成寡聚核苷酸探针。cRNA和cDNA的常用标记物有32S、32P、3H等放射性核素和荧光素、生物素、地高辛等非放射性物质。组织学应用的原位杂交术主要是染色体...
...此法是在亚硫酸盐催化下,生物素酰肼可置换寡核苷酸探针中胞嘧啶上的氨基,使生物素结合到DNA分子上而制成生物素化DNA探针。此法优点是采用通用试剂和技术,检出敏感。Vicied 等人指出DNA和RNA中胞嘧啶N-4位置在亚硫酸氢盐存在下可用...
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