检测Apo(a)表型的方法中,以Utermann法或其改良法最为常用。这类方法先用SDS-PAGE分离Apo(a)异构体,然后用特异的多克隆或单克隆抗体作免疫印迹显示。 1.仪器与试剂 电泳仪,夹心式垂直板电泳槽及凝胶转移电泳槽,NC膜(孔径0.45μm,转移电泳用);高分子量系列蛋白标准(MW67000~669000,Pharmacia产品);ApoB10...
载脂蛋白(a)的基因由10~45个内含子和11~46个外显子组成(见图4-3A)。这种变异主要取决于Kringle(丹麦烤卷饼)-4功能区的数目,此数目可高达37。其中24个Kringle-4功能区核苷酸序列完全相同,均由342核苷酸碱基对组成。第24、27、28及29区仅相异于3个核苷酸。其他的区有11~71核苷酸序列的不同。Apo(a)基因的结构与血纤维...
...子。幽门螺(Hp)感染是胃癌发病的重要触发因子,但其分子生物学机制仍不清楚。最近,德国的一项研究首次证实,Hp感染能刺激胃癌细胞VEGF-A基因的表达,MEK-1/ERK1/2依赖的Hp菌株Sp1和Sp3活化是其细胞内途径。 Schaefer等分析了Hp对胃癌细胞VEGF-A基因的影响以及有关的信号级联放大、调节启动子元件和转录因子。用VEGF-A缺失的荧光...
DNA限制性片段长度多态性(restricitionfragment length polymorphism, RFLPs)连锁分析法是指由于缺失、重排或碱基置换的结果,使DNA分子中原有的某种限制性内切酶的识别位点发生改变,或是消失或是增加,所以酶切后生成的DNA片段的长度也随之改变。这种DNA限制性片段长度的变化往往同某种疾病的连锁关系,因而可作为这种疾...
Apo(a)是一结构复杂的糖蛋白,Lp(a)特征性的蛋白成分,占Lp(a)的20%。Apo(a)含糖量30%~35%,通过一个或多个二硫键与ApoB100相连。Apo(a)分子量在250000~800000之间,是目前所发现的最具多态性的 人类 蛋白质。Apo(a)多态性产生的原因在于其肽链长度不等而且糖基化程度不同;这是由于Apo(a)基因中Kringle...
Apo(a)是一结构复杂的糖蛋白,Lp(a)特征性的蛋白成分,占Lp(a)的20%。Apo(a)含糖量30%~35%,通过一个或多个二硫键与ApoB100相连。Apo(a)分子量在250000~800000之间,是目前所发现的最具多态性的 人类 蛋白质。Apo(a)多态性产生的原因在于其肽链长度不等而且糖基化程度不同;这是由于Apo(a)基因中Kringle...
Apo(a)是一结构复杂的糖蛋白,Lp(a)特征性的蛋白成分,占Lp(a)的20%。Apo(a)含糖量30%~35%,通过一个或多个二硫键与ApoB100相连。Apo(a)分子量在250000~800000之间,是目前所发现的最具多态性的 人类 蛋白质。Apo(a)多态性产生的原因在于其肽链长度不等而且糖基化程度不同;这是由于Apo(a)基因中Kringle...
RFLP分析是限制性内切酶、核酸电泳、印迹(blot)技术、探针-杂交技术的综合应用,多用于临床遗传性疾病的基因诊断。基本原理是遗传性疾病多有基因的缺陷,如基因缺失、基因插入、编码区小范围核苷酸序列改变或点突变等。前二者可将纯化的正常人和病人DNA同时用限制性内切酶切成片段,经电泳分离、印迹、探针杂交等找到目的基因。由于患者基因的缺失或插入,造成被限制性内切...
随着对基因认识的不断深入,发现在同种生物的不同个体之间,尽管其蛋白质产物的结构和功能完全相同或仅存在着细微的差异,但在DNA水平却存在着差异,尤其在不编码蛋白质的区域以及没有重要调节功能的区域表现更为突出。这种不影响生物体表型的DNA突变被称为中性突变。 分子生物学技术的不断发展已使得从DNA水平直接分析这类突变成为可能。 目前应用较多且成熟的方法是限制性片...
载脂蛋白AⅠ、AⅡ、AⅣ、CⅠ、CⅡ、CⅢ以及E的基因结构非常相似。除ApoAⅣ缺少第1个内含子外,其余的载脂蛋白基因均由三个内含子与四个外显子组成(如图4-1所示)。内含子的分布位置几乎相同。第一个内含子截断5'未翻译区,第二个内含子截断信号肽的编码区,靠近信号肽的切割部位,第三个内含子截断编码成熟蛋白质的区域。尽管ApoAⅣ缺少第一个内含子,它的第二及第...
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