...一、特异性目的核酸（或基因）的制备核酸分子探针的制备首先需要获得所要的特异性核酸或其片段。可用以下方法制备：（1）直接分离基因核酸：即从基因组上直接用内切酶切下所需基因。（2）化学合成基因核酸：即以单核苷酸为原料，以固相磷酸三酯法合成某一...
...技术中最常用的工具酶酶主要用途限制性核酸内切酶识别DNA特定序列，切断DNA链DNA聚合酶Ⅰ或其大片段（Klenow）①缺口平移制作标记DNA探针②合成cDNA的第二链③填补双链DNA3’凹端④DNA序列分析耐热DNA聚合酶（Taq DNA...
...。在电镜下观察时，则要求底物的终末产物具有较高的电子密度。由于辣根过氧化物酶（Horse Radish Peroxidase, HRP）具有稳定性强和反应特异性高等优点，是目前应用最多的酶标记物。实验方法包括酶标记抗体法、非标记抗体酶法和非...
...载体中，只修饰载体区而不修饰插入片段。当用放射性同位素32P和35S标记核酸时，由于同位素是掺入核酸骨架的磷酸二脂键中，因此碱基未发生任何修饰。在5’端的磷酸基团上可进行化学修饰，这是标记寡核苷酸探针的有效方法。因为这种方法是在一个探针分子...
...降解（相对RNA而言），一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探针的标记方法较成熟，有多种方法可供选择，如缺口平移，随机引物法，PCR标记法等，能用于同位素和非同位素标记。...
...基因探针根据标记方法不同可粗分为放射性探针和非放射性探针两大类，根据探针的核酸性质不同又可分为DNA探针，RNA探针，cDNA探针，cRNA探针及寡核苷酸探针等几类，DNA探针还有单链和双链之分。下面分别介绍这几种探针。...
...stickier）。可与组织产生较高的非特异性结合，但此缺陷可在杂交后漂洗液中加用酶漂洗来解决。最近，Wolf等（1987）建议插入确定长度的寡核苷酸至载体内产生cRNA分子，这种cRBA分子称为“寡核苷酸核酸探针”（oligoribo－...
...Boehringer – ManubeimInc, Mannhein, FRG可提供此药盒）。在上述各例中，为简便可采用直接法（图20-4A），为提高敏感度可采用间接法（图20-4B）。图20-4 生物素标记核酸探针荧光免疫反应图解生物素和地高辛用缺口平移...
...探针，后者可用光敏生物素制剂BPA标记样品核酸。8．固相膜核酸杂交膜的选用。杂交膜是一种多孔、表面积很大的固相载体，核酸一旦固定在上面，就可用杂交法进行检测。最常使用的膜是硝酸纤维素膜，用于放射性和非放射性标记探针都很方便，产生的本底浅，与...
...提高pH值来实现。使单链聚合双链的过程称为退火或复性。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。核酸杂交技术基本上是Hall等1961年的工作开始的，探针与靶序列...
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