...反之,如用SPA抑制玫瑰花环形成,则可定量测定细胞表面的IgG。应用SPA与胶体金或铁蛋白相结合,可在电镜水平检查抗原抗体反应的定位。特别是蛋白A—胶体金技术(Protein A—Gold technique, PGA技术)自Pomano和...
...金属类标记物的免疫标记法同切片免疫染色,即将标记物与抗体相结合,通过直接或间接法显示抗原部位。胶体金可与蛋白A相结合后与IgG分子中的Fc 段相结合。哪与卵白素(a-vidin)相结合可与结合抗体的生物素(biotin)反应。免疫金银...
...值时应注意,胶体金会阻塞pH计的电极,不可直接将电极插入胶体金溶液中,宜先用终浓度为0.15的聚乙二醇(PEG,20000)稳定胶体金后,再胶体金的pH值。2.将1/10体积的合适浓度的蛋白质溶液加于胶体金溶液中,放置室温反应2~5min。...
...在电镜水平应用较为广泛,因该法具有特异性中、灵敏度高、方法简便和背景染色淡等优点。蛋白A的免疫特异性在第五章 已作了介绍,PAg复合物制备方法简便,作为第二抗体,无种属特异性,可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg ...
...胶体金制备完毕后须经电镜下质量鉴定才能应用。...
...广泛。(一)原理以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体,为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时,标本中含抗原被膜上抗体捕获,其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因...
...PAS法)示生长激素细胞(上海医科大赵培林教授供图)图1-7 免疫细胞化学(蛋白A-胶体金法)和原位杂交术示大鼠垂体催乳素细胞电镜像 N催乳素细胞核↑分泌颗粒内显示金粒粗面内质网(RER)显示银粒(加拿大Douglas医院研究中心童毅爱博士赠图...
...标记好的免疫金探针必须经过纯化处理以后才能用于免疫细胞化学染色。纯化的目的是除去其中未标记的蛋白质,未充分标记的胶体金以及在标记过程中可能形成的各种聚合物。...
...SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记,应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术,后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA在PAP法中可代替桥抗体。1.SPA—HRP用于间接法的...
...nm)标记抗体直径比常用胶体金(5~40nm)及铁蛋白标记抗体(12nm)小,因而对固定组织具有更好的穿透力,可用于抗原的超威结构定位,尤其是免疫电镜的包埋前染色。结合免疫酶及不同大小胶体金标记抗体,还可用于抗的双标记及多标记。非特异性背景...
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