探针 是一小段 单链 DNA或者RNA片段(大约是20到500bp), 用于检测与其互补的 核酸 序列。双链DNA加热变性成为单链,随后用 放射性同位素 (通常用磷-32)、萤光染料或者酶(如 辣根 过氧化物酶)标记成为探针。磷-32通常被掺入组成DNA的四种 核苷酸 之一的 磷酸基 团中,而 荧光染料 和酶与核酸序列以 共价键 相连。 当将探针与样品杂交时...
DNA是遗传信息的载体,遗传信息的作用通常由蛋白质的功能来实现,但DNA并非蛋白质合成的直接模板,合成蛋白质的模板是RNA。正常细胞遗传信息的流向是: 与DNA相比,RNA种类繁多,分子量相对较小,一般以单股链存在,但可以有局部二级结构,其碱基组成特点是含有尿嘧啶(uridin,U)而不含胸腺嘧啶,碱基配对发生于C和G与U和A之间,RNA碱基组成之间无一定的...
探针制备就是目的基因的标记,核酸标记方法常用的有缺口平移法、随机引物法、末端标记法等。标记物质有放射性元素(如 32 P等)和非放射性物质(如生物素、地高辛等)。 32 P是最常用的核苷酸标记同位素,被标记的dNTP本身就带有磷酸基团,便于标记,特点是比活性高,可达9000Ci/mmol;发射的β射线能量高,可达1.70MeV,用它标记的探针自显影时间短,灵...
(一) DNA 探针 DNA探针是最常用的 核酸 探针,指长度在几百 碱基对 以上的双链DNA或 单链DNA 探针。现已获的DNA探针种类很多,有 细菌 、 病毒 、 原虫 、 真菌 、动物和人类 细胞 DNA探针,这类探针多为某一 基因 的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的 毒力 因子 基因探针 和人类ALU探针,这些DN...
DNA是遗传信息的载体,遗传信息的作用通常由蛋白质的功能来实现,但DNA并非蛋白质合成的直接模板,合成蛋白质的模板是RNA。正常细胞遗传信息的流向是: 与DNA相比,RNA种类繁多,分子量相对较小,一般以单股链存在,但可以有局部二级结构,其碱基组成特点是含有尿嘧啶(uridin,U)而不含胸腺嘧啶,碱基配对发生于C和G与U和A之间,RNA碱基组成之间无一定的...
转录的主要过程见图17-3,为研究和叙述方便,可将RNA合成分为识别与起始、延长和终止三个阶段。 图17-3 转录的主要过程
不论原核或真核生物的rRNAs都是以更为复杂的初级转录本形式被合成的,然后再加工成为成熟的RNA分子。然而绝大多数原核生物转录和翻译是同时进行的,随着mRNA开始的DNA上合成,核蛋白体即附着在mRNA上并以其为模板进行蛋白质的合成,因此原核细胞的mRNA并无特殊的转录后加工过程,相反,真核生物转录和翻译在时间和空间上是分天的,刚转录出来的mRNA是分子很大...
...做模板链(templatestrand),又叫做无意义链。DNA双链中另一条不做为模板的链叫做编码链,又叫做有意义链,编码链的的序列与转录本RNA的序列相同,只是在编码链上的T在转录本RNA为U,由于RNA的转录合成是以DNA的一条链为模板而进行的,所以这种转录方式又叫做不对称转录。②都以四种三磷酸核苷的底物,原料;③都遵循DNA与RNA之间的碱基配对原由,...
DNA是遗传信息的载体,遗传信息的作用通常由蛋白质的功能来实现,但DNA并非蛋白质合成的直接模板,合成蛋白质的模板是RNA。正常细胞遗传信息的流向是: 与DNA相比,RNA种类繁多,分子量相对较小,一般以单股链存在,但可以有局部二级结构,其碱基组成特点是含有尿嘧啶(uridin,U)而不含胸腺嘧啶,碱基配对发生于C和G与U和A之间,RNA碱基组成之间无一定的...
最常用的同位素是α- 32 PdNTP, 3 HdNTP,及 35 SdNTP,多用缺品平移法、末端标记法,随机引物延伸法和反转录标记法。在以mRNA制备cDNA时,同时掺入标记的脱氧核苷酸,制出cD-NA标记探针。
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