...(2h)检测RNA。(3)磁珠吸附杂交:Gen-Probe公司最近应用丫啶翁酯(Acridinium ester)标记DNA探针、这种试剂可用更敏感的化学方法来检测,探针和靶杂交后,杂交物可特异地吸附在磁化的有孔小珠(阳离子磁化微球体)上,...
...双链过程称为退火或复性。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素标记成为探针,再与另一种核酸单链进行分子杂交。(三)探针——靶分子反应从化学和生物学意义上理解,探针是一种分子,它带有供反应后检测的合适标记物,并与特异靶...
...在细胞遗传学(Cytogenetics),生前诊断(Prenatal diagnosis),肿瘤和传染性疾病的诊断,生物学剂量测定(biological dosimetry)和病毒学的病原学诊断等。随着核酸探针的制备,标记方法和基本操作方法...
...1.菌落原位杂交(Colonyin situ hybridization) 菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸纤维素滤膜上,然后将滤膜上的菌落裂菌以释出DNA。将NDA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交,放射自显影检测菌落杂交信号...
...mol/L EDTA3.探针沉淀液(三)cRNA探针非同位素标记(地高辛及生物素)1.标记液△:生物素标记时为10mmol/L的生物素-11-UTP※:为检测标记率而加。2.转录标记终止液(1)0.2mol/L EDTA:用于地高辛标记法(2)...
...(一)探针的选择根据不同的杂交实验要求,应选择不同的核酸探针。在大多数情况下,可以选择克隆的DNA或cDNA双链探针。但是在有些情况下,必须选用其它类型的探针如寡核苷酸探针和RNA探针。例如,在检测靶序列上的单个碱基改变时应选用寡核苷酸...
...应用领域逐渐扩大并在两个主要进行了技术法的改进。一方面是应用一系列放大手段增强检测的灵敏度(详见二十二章 ),另一方面是提高其分辨率,即向电镜水平发展。Jacob(1971)首先用3H标记的核酸RNA探针与DNA杂交并在电镜水平显示获得成功,...
...的新兴技术。尤其是近年来与PCR技术结合的原位PCR技术和原位免疫PCR技术敏感性很高。本书第十八至二十三章 对有关分子生物学基础理论、核酸分子探针制备、原位分子杂交技术、聚合酶链式反应(PCR)、核酸分子杂交电镜技术、杂交与免疫细胞化学双...
...Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交(见Cox et al 1984),核酸探针为单链的RNA分子,产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆(图20-2)。由于它是单链的,不像双链的DNA探针,在溶液中不会再退火(...
...基本操作方法1.Y染色体3H标记DNA探针原位杂交技术(1)探针标记,以3H标记Y染色体DNA探针(详见第19章 )。(2)原位杂交①RNA酶的前处理:取1ml RNA酶保存液(10mg/ml)于250ml 2×SSC内,预热于37℃水浴中...
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