...进入其内部,而大分子物质却被排阻于外部,在过滤的过程中,溶液中的物质按不同分子量筛选分开,达到分离纯化的目的。这一技术又称为分子筛层析,或者称为凝胶层析。凝胶是不溶于水,在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能的一类化合物。目前主要有葡聚糖...
...每一寡核苷酸分子可带有若干个放射性原子,放射性比活度可高达2×1010计数/(min·mg)。附图 DNA聚合酶i Klenow片段标记合成寡核苷酸探针寡核苷酸探针的非放射性标记时,可用以下几种方法:1.酶延伸法合成与探针目的基因的3’-端...
...为了体外研究脂蛋白的细胞代谢和脂蛋白受体活性,早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纤维细胞125I标记LDL的配体-受体结合分析法。其基本原理是:用放射性同位素(常用125I)标记LDL后,与细胞(通常为培养的单层成...
...光敏生物素有一个连接臂,一端连接生物素,另一端有芳基叠氮化合物。在可见光照射下,芳基叠氮化合物可能变成活化芳基硝基苯,很易与DNA或RNA的腺嘌呤N—7位置特异结合,大约每50个碱基结合一个生物素,所以只用于标记大于200个核苷酸的片段。...
...尤其重要;④标记简便、易防护。要准确测量B与F的放射性,必须有足够的放射性强度。所选用的标记抗原的量,在使用125I时达5000~15000cpm。(三)抗体应选择特异性高、亲和力强及滴度好的抗体,用于放射免疫测定。根据稀释曲线,选择适当的...
...创造了原位杂交细胞或组织化学技术。Orth(1970)应用3H标记的兔乳头状瘤病毒cRNA探针与兔乳头状瘤组织的冰冻切片进行杂交,首次用原位杂交检测了病毒DNA在细胞中的定位,但当时的工作多采用冰冻组织切片或培养细胞,探针均采用同位素标记。...
...Ab;②标记一种抗体,就能与一种以上的相应抗原结合鉴定多种抗原或抗体;③敏感性比直接法高。缺点:①参加反应因素多,易出现非特异性反应;②实验方法复杂。(3)补体结合法:是标记补体抗体的方法,第一步是将抗体和补体加入反应体系;第二步是加入标记...
...和识别。 常用的理化鉴定方法主要有定性反应、色谱法和波谱法。 (1)颜色或沉淀反应 各类成分因结构或功能团的不同,常与某些特定试剂发生反应,产生不同的颜色或沉淀。如生物碱与碘化铋钾生成橙色沉淀;蒽醌类与碱液反应生成橙、红、蓝色;黄酮类与盐酸...
...进入其内部,而大分子物质却被排阻于外部,在过滤的过程中,溶液中的物质按不同分子量筛选分开,达到分离纯化的目的。这一技术又称为分子筛层析,或者称为凝胶层析。凝胶是不溶于水,在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能的一类化合物。目前主要有葡聚糖...
...生物素-补骨脂素是另一种生物素光敏物质,在长波长紫外线照射下与嘧啶碱基发生光化学反应,加成到DNA中,去除小分子后,得到生物素标记核酸探针。此法可标记单链或双链DNA或RNA,及寡核苷酸。灵敏度与放射性探针相当。标记方法:取DNA或片段...
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