...(一)cRNA探针的同位素标记1.标记液(转录标记)2.转录缓冲液※:用地高辛或生物素标记时,用UTP替代。3.标记终止液4.标记探针水解液先用dH2O悬浮探针,再加入后两种试剂,轻轻振摇混合,于60℃条件下反应。5.探针水解时间注:LO...
...梅毒的核酸探针 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction),简称PCR,是一种分子生物学技术,用于放大特定的DNA片段。可看作生物体外的特殊DNA复制。 分子杂交法:阴性 阳性:梅毒感染。...
...的是,cDNA探针不含有内含子序列。此外,还可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段,称为寡核苷酸探针。2.探针的制备 进行分子突变需要大量的探针拷贝,后者一般是通过分子克隆(molecular cloning)获得的。克隆是...
...RNA探针比cDNA探针的敏感性提高10倍以上,在许多优点。它们是单链,不需变性,也没有互补链的干扰,与靶基因杂交比DNA探针更稳定。Bio-11-dUTP可通过Sp6、T3和T7RNA聚合酶掺入到RNA转录子中。标记方法:其下列反应体积...
...Angerer及其同事们首先应用RNA探针于原位杂交(见Cox et al 1984),核酸探针为单链的RNA分子,产生自具有质粒逆转录系统的cDNA克隆(图20-2)。由于它是单链的,不像双链的DNA探针,在溶液中不会再退火(...
...虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA...
...加DNA聚合酶(SABC)8u,混匀,37℃,2h,加0.5mol/l EDTA(Ph8.0)2μl,终止反应。在随机引物标记体系中,加入不同梯度浓度比值的Bio-11-dUTP/dTTP(%),发现二者比值明显影响探针标记率和显色灵敏度。...
...在研究心血管疾病时,主要运用显微注射法、基因打靶或基因剔除等方法制备各种TGM模型。1.显微注射法Gordon等人首次成功地将含有HSV和SV40DNA片段的重组质粒DNA以显微注射法导入小鼠受精卵的雄原核内,得到了带有这种外源DNA顺序...
...ELISA方法简便快速敏感特异性高是公认较好的一种诊断方法 (四)分子生物学诊断方法 1.DNA探针(DNAProbe)DNA探针是用DNA制备的诊断试剂用于检测或鉴定特定的细菌方法是用一段已标记的特定的DNA片段(探针)与标本中已变性的...
...,可增强人体的抗病能力。人乳的营养保健价值很高,在一定程度上与人乳富含乳铁蛋白肽有很大的关系。 由于多方面的因素制约,不大可能将人乳转化为商品,更不太可能用人乳作原料来提取和制备乳铁蛋白肽。可喜的是,牛初乳、鲜牛奶、奶酪、乳清以及其他...
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