(一) DNA 探针 DNA探针是最常用的 核酸 探针,指长度在几百 碱基对 以上的双链DNA或 单链DNA 探针。现已获的DNA探针种类很多,有 细菌 、 病毒 、 原虫 、 真菌 、动物和人类 细胞 DNA探针,这类探针多为某一 基因 的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的 毒力 因子 基因探针 和人类ALU探针,这些DN...
虽然一般认为DNA探针敏感度不如cRNA探针,但在病毒的检测等领域中DNA探针仍得到广泛的应用。 在原位杂交细胞化学的操作步骤方面与cRNA探针基本相同,所不同的是:(1)杂交时需先在高温80~95℃短时处理,使DNA探针及细胞内靶DNA变性,解离成单链,迅置于冰上冷却。然后置于37℃~42℃杂交过夜。(2)RNA酶的溶液的冲洗不能减低背景,因此,在操作步骤...
中药生物鉴定法是近年来兴起的中药品质鉴定新方法,它和传统的基原鉴定法、性状鉴定法、显微鉴定法、理化鉴定法一起,并称为中药的五大鉴定法。生物鉴定法具有先进性、适用性、可操作性和专属性强等特征,并且能够突出中药的药效学作用,准确性高。中药生物鉴定法为中药质量现代化和质量标准规范化的研究提供了新思路。但此方法尚处于起步阶段,在具体实施中相关方法和技术还有待于进一步...
DNA探针是最常用的核酸探针,指长度在几百碱基对以上的双链DNA或单链DNA探针。现已获得DNA探针数量很多,有细菌、病毒、原虫、真菌、动物和 人类 细胞DNA探针。这类探针多为某一基因的全部或部分序列,或某一非编码序列。这些DNA片段须是特异的,如细菌的毒力因子基因探针和人类Alu探针。这些DNA探针的获得有赖于分子克隆技术的发展和应用。以细菌为例,目前分...
(一)光敏生物素标记cRNA探针的应用 以线性质粒DNA为模板合成未加标记物的cRNA探针,使其最终浓度为0.5~1.0μg/μl(500~1000ng/μl),再与等体积的光敏生物素(1μg/μl)混合。在150瓦卤素灯下,距离光源20cm处照射30min。用仲丁醇抽提游离生物素,再用丁醇沉淀回收光敏生物素cRNA探针,将其溶于适量的灭菌双蒸水,用紫外分光...
...径0.3-0.8厘米。表面粗糙,有不规则结节状隆起,有须根及须根残基。节间表面平滑如茎杆,习称“过桥”。其上部多残留褐色鳞叶,顶端常留有残余的茎或叶柄。表面灰黄色或黄褐色。质硬,断面不整齐,皮部橙红色或暗棕色,木部鲜黄色或橙黄色,呈放射状排列,髓部有时中空。气微,味极其苦。 2、雅连 药材多为单枝、略呈圆柱形,形如“蚕状”,微弯曲,长4-8厘米,直径0.5-...
RNA探针是一类很有前途的核酸探针,由于RNA是单链分子,所以它与靶序列的杂交反应效率极高。早期采用的RNA探针是细胞mRNA探针和病毒RNA探针,这些RNA是在细胞基因转录或病毒复制过程中得到标记的,标记效率往往不高,且受到多种因素的制约。这类RNA探针主要用于研究目的,而不是用于检测。例如,在筛选逆转录病毒 人类 免疫缺陷 病毒(HIV)的基因组DNA克...
应用于电镜水平的免疫法,可分为包埋前染色和包埋后染色,由于包埋前染色对细胞膜的穿透性差,一般只用于细胞表面的抗原标记,如需穿透细胞膜,则需辅以冻融法或加入Triton X—100、皂素等活性剂,后者会加重细胞超威结构的破坏,因此,现较普遍采用包埋后染色,现分别介绍如下:
基因探针 基因探针,即 核酸 探针 ,是一段带有检测标记,且顺序已知的,与目的 基因 互补的核酸序列(DNA或RNA)。基因探针通过 分子杂交 与目的基因结合,产生杂交信号,能从浩翰的 基因组 中把目的基因显示出来。根据杂交原理,作为探针的核酸序列至少必须具备以下两个条件:①应是 单链 ,若为双链,必须先行变性处理。②应带有容易被检测的标记。它可以包括整个基...
前述三种探针均是可克隆的,一般情况下,只要有克隆的探针,就不用寡核苷酸探针。在DNA序列未知而必须首先进行克隆以便绘制酶谱和测序时,也常应用克隆。克隆探针一般较寡核苷酸探针特异性强,复杂度也高,从统计学角度而言,较长的序列随机碰撞互补序列的机会较短序列少,克隆探针的另一优点是,可获得较强的杂交信号,因为克隆探针较寡核苷酸探针掺入的可检测标记基因更多。但是,较...
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