...纵坐标，蛋白质用量为横坐标作一曲线，取曲线最先与横轴相接近的那一点处的蛋白质用量为最适稳定量。图5.2中10nm的胶体金溶液中蛋白质的最适稳定量为45μg/ml。图5-2 蛋白最适稳定量示意图（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白质用量...
...（1）透析除盐：蛋白质溶液内应除去多余的电解质，不然过高的盐类物质会降低胶体金颗粒的Zeta电位，影响蛋白质的吸附，因此，标记之前必须彻底除盐。一般将蛋白质置入透析袋中然后直接放入双蒸水或极低浓度的盐水（0.005mol/l NaCl ,...
...广泛。（一）原理以双抗体夹心法为例。在硝酸纤维素膜的膜片中央滴加纯化的抗体，为膜所吸附。当滴加在膜上的标本液体渗滤过膜时，标本中含抗原被膜上抗体捕获，其余无关蛋白等没滤出膜片。其后加入的胶体金标记也在渗滤中与已结合在膜上的抗原相结合。因...
...胶体金与蛋白质的结合成功与否，取决于pH值，一般只有在蛋白质等电点（PI）略偏碱的条件下二者才能牢固地结合，因此，标记之前须将胶体金溶液的pH值调至待标记蛋白质的等电点略偏碱。需要提高胶体金的pH值时可用0.1molK2CO3，需要降低...
...在电镜水平应用较为广泛，因该法具有特异性中、灵敏度高、方法简便和背景染色淡等优点。蛋白A的免疫特异性在第五章 已作了介绍，PAg复合物制备方法简便，作为第二抗体，无种属特异性，可以免去不同种属动物要制备不同的特异性免疫球蛋白。PAg ...
...典型的肾小球，作出标记。然后在组织块上定出相应部位，用刀切去周围组织，修成约0.1mm大小之组织块，再用超薄切片机切出500 。A厚度的超薄切片。（3）免疫标记：目前应用最多的是胶体金标记抗体（详见第七章 ）。2．免疫电镜观察肾组织标本皆...
...标记的过氧化物酶—抗过氧化物酶技术（即PAP法，见第四章 ）。二、电镜标本制备方法免疫酶细胞化学技术可用于包埋前和包埋后染色，但以前者应用较多。1．单层细胞培养物免疫酶染色法（1）用4%多聚甲醛（在0.05mol/l 磷酸缓冲液中，pH...
...一种较为理想的免疫电镜技术。三、SPA在免疫细胞化学染色中的应用SPA可为多种示踪物如荧光素、酶、胶体金、铁蛋白等所标记，应用较广的为酶标记SPA和金标记SPA技术，后者将在第七章 中叙述。标记SPA常用的酶为HRP。可应用于间接法。SPA...
...除去未结合的标记抗体溶液，然后转入常规双固定和电镜包埋。（2）间接法：①将组织切片浸于第一抗体液中，室温30～60min。②以大量冷缓冲液充分搅拌洗涤，至少3次，每次30min。③浸入铁蛋白标记抗体液中，室温30min。④如②，用缓冲液充分...
...结合浓度为10.3±1.1μg/mg细胞蛋白，FH杂合子为5.2±0.8μg/mg细胞蛋白，FH纯合子0.9±0.2μg/mg细胞蛋白。图20-1 直接荧光法测LDL-R操作步骤亦有用胶体金标记LDL的，但是在受体-配体结合分析法中，正常人与...
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